[发明专利]一种重组蛋白rPmt4p及其表达与在制备防治侵袭性白念珠菌感染疫苗中的应用

权利要求书

1.一种重组蛋白rPmt4p，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种如权利要求1所述的重组蛋白rPmt4p在制备预防或治疗侵袭性白念珠菌感染疫苗中的应用。

3.一种预防或治疗侵袭性白念珠菌感染的蛋白疫苗，其特征在于，该蛋白疫苗的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

4.一种如权利要求3所述的预防或治疗侵袭性白念珠菌感染的蛋白疫苗的制备方法，包括以下步骤：

A、克隆如SEQ ID NO:2所示的DNA序列；

B、构建含有如SEQ ID NO:2所示的DNA序列的重组质粒；

C、在真核表达系统酿酒酵母INVSc1中表达如SEQ ID NO:1所示的重组蛋白。

5.根据权利要求4所述的预防或治疗侵袭性白念珠菌感染的蛋白疫苗的制备方法，其特征在于，步骤A中，克隆以白念珠菌SC5314基因组DNA为模板，设计并合成引物如下：

PMT4-Exp-F如SEQ ID NO:3所示；

PMT4-Exp-R如SEQ ID NO:4所示。

6.根据权利要求4所述的预防或治疗侵袭性白念珠菌感染的蛋白疫苗的制备方法，其特征在于，步骤B中，构建所用的质粒为PYES2/CT质粒。

7.根据权利要求4所述的预防或治疗侵袭性白念珠菌感染的蛋白疫苗的制备方法，其特征在于，将步骤(A)中获得的DNA序列插入到PYES2/CT质粒中，构建PYES2/CT-PMT4重组质粒，将上述重组质粒转化感受态细胞DH-5α，重组质粒酶切鉴定正确后送测序，序列如SEQ ID NO:2所示；

将酶切和测序结果都为阳性的重组质粒转染到表达菌株酿酒酵母INVSc1中；

菌落PCR、基因组PCR鉴定阳性转染克隆；

鉴定为阳性的克隆在SC-ura^-的液体培养基中诱导表达目的重组蛋白。