[发明专利]一种肌酸水解酶及其编码基因和应用有效
| 申请号： | 201410359141.2 | 申请日： | 2014-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN104109658A | 公开（公告）日： | 2014-10-22 |
| 发明（设计）人： | 陈坚;堵国成;康振;钱俊佳;戴俊 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/14 | 分类号： | C12N9/14;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 何自刚;王玉松 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 水解 及其 编码 基因 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种来源于节杆菌的肌酸水解酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.编码权利要求1所述肌酸水解酶的基因，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种重组质粒，其特征在于，其含有权利要求2所述的肌酸水解酶基因。
4.一种含有权利要求3所述的重组质粒的重组肌酸水解酶工程菌。
5.一种含有权利要求3所述的重组质粒的重组肌酸水解酶细胞系。
6.构建权利要求4所述工程菌的方法，其特征在于，将权利要求2所述的肌酸水解酶基因连接至大肠杆菌表达质粒pET20b(+)，构建重组表达质粒pET20b-cre，将制备的重组质粒pET20b-cre经化学转化法转入E.coliBL21感受态中。
7.一种发酵生产重组肌酸水解酶的方法：从甘油管中按0.4％的接种量将权利要求5所述的工程菌接入20mL/250mL三角瓶，回旋式摇床转速200rpm，培养温度为37℃，培养12h；发酵培养：将培养好的种子培养液按1％(v/v)的接种量接种至50mL/500mL三角瓶中进行培养，培养温度为37℃，摇床转速200rpm；待OD600＝0.6，加入终浓度为0.6mmol/L的IPTG诱导表达，培养10h。
8.权利要求1所述肌酸水解酶在测定人体肌酐含量、评价人体肾脏功能中的应用。
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