[发明专利]一种基于检测循环抗原的诊断黑热病的免疫层析试条

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域，尤其涉及一种免疫层析试条，具体来说是一种基于检测循环抗原的诊断黑热病的免疫层析试条。

背景技术

内脏利什曼病或称黑热病，是由杜氏利什曼原虫种团(Leishmania donovanicomplex)或婴儿利什曼原虫(L.infantum)/恰氏利什曼原虫(L.chagasi)的原虫寄生于人体的淋巴—巨噬细胞系统所引起的一种寄生虫病，由媒介白蛉叮咬传播。该病在世界范围内流行甚广，包括亚、欧、非及中、南美洲的61个国家，每年新发生的病例数约有50万。在上世纪60年代以前我国也深受其害，病例曾达60万，死亡率极高。准确检测感染和诊断是监测工作急需和治疗的关键所在，因此，对黑热病诊断技术的研究始终受到重视。

以骨髓、脾等穿刺物涂片染色镜检的方法是黑热病最古老的诊断方法，迄今仍是黑热病诊断的“金标准”。国外报道显示骨髓和淋巴结穿刺物涂片镜检敏感性分别为60％～75％和30％～50％，国内报道以骨髓、淋巴结、脾穿刺涂片镜检检出率依次为:80～90％、46～87％、96～98％。由于这种检测方法对操作人员的技术要求非常高，在疾病诊断与流行病学调查中应用受到限制。

免疫学方法在黑热病诊断上的应用越来越受到重视，常用检测方法有间接血凝法(Indirect haemagglutination assay；IHA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、酶联免疫电转移印渍法(Enzyme-linked immunoelectrotransfer blot assay；EITBA),以及金标免疫点印渍法(Gold-labelled dot blotting；GDB；俗称膜法或渗滤法)。但这些方法或费时费力、或需要冷链系统保存试剂、或对仪器设备及操作人员的要求较高而不适合现场使用。

发明内容

本发明的目的在于提出一种基于检测循环抗原的诊断黑热病的免疫层析试条，所述的这种诊断黑热病的免疫层析试条要解决现有技术中的诊断黑热病的准确率不高，而且费时费力的技术问题。

本发明提供了一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No.9239。

本发明还提供另外一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No.9240。

本发明还提供了一种可特异性结合杜氏利什曼原虫无鞭毛体虫体抗原的单克隆抗体，由保藏号为CGMCC No.9240的小鼠杂交瘤细胞产生。

本发明还提供了另外一种抗原表位不同的可特异性结合杜氏利什曼原虫无鞭毛体虫体抗原的单克隆抗体，由保藏号为CGMCC No.9239的小鼠杂交瘤细胞产生。

本发明还提供了一种基于检测循环抗原的诊断黑热病的免疫层析试条，包括一个样品垫、一个紧密连接于所述样品垫的含有胶体金标记探针的金标垫、一个与所述金标垫紧密连接的纤维素膜、一个紧密连接于所述纤维素膜另一端的吸水垫，所述纤维素膜上远离金标垫的一端设置质控线，在质控线和金标垫之间的纤维素膜上设置检测线，其中，所述的检测线由特异性结合杜氏利什曼原虫无鞭毛体虫体抗原的单克隆抗体组成，由保藏号为CGMCC No.9240的小鼠杂交瘤细胞产生，所述的胶体金标记探针为抗原表位不同的特异性结合杜氏利什曼原虫无鞭毛体虫体抗原的单克隆抗体，由保藏号为CGMCC No.9239的小鼠杂交瘤细胞产生，所述的质控线由特异性结合胶体金标记探针的二抗或链球菌G蛋白(SPG)或金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)组成。

本发明还提供了另外一种基于检测循环抗原的诊断黑热病的免疫层析试条，包括一个样品垫、一个紧密连接于所述样品垫的含有胶体金标记探针的金标垫、一个与所述金标垫紧密连接的纤维素膜、一个紧密连接于所述纤维素膜另一端的吸水垫，所述纤维素膜上远离金标垫的一端设置质控线，在质控线和金标垫之间的纤维素膜上设置检测线，其中，所述的检测线由特异性结合杜氏利什曼原虫无鞭毛体虫体抗原的单克隆抗体组成，由保藏号为CGMCC No.9239的小鼠杂交瘤细胞产生，所述的胶体金标记探针为抗原表位不同的特异性结合杜氏利什曼原虫无鞭毛体虫体抗原的单克隆抗体，由保藏号为CGMCC No.9240的小鼠杂交瘤细胞产生所述的质控线由特异性结合胶体金标记探针的二抗或链球菌G蛋白(SPG)或金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)组成。

进一步的，所述的质控线由特异性结合胶体金标记探针的羊抗鼠IgG组成。