[发明专利]一种褐藻胶裂解酶基因algp及其制备方法与表达

说明书

本发明涉及一种褐藻胶裂解酶基因algp及其制备方法与表达。揭示了一种海洋弧菌来源的褐藻胶裂解酶，其蛋白稳定性好，生物活性高。本发明还公开了褐藻胶裂解酶基因algp、含有褐藻胶裂解酶基因algp的载体和宿主细胞，以及重组表达褐藻胶裂解酶的方法。本发明的技术方案可以实现以较低的成本大量生产重组褐藻胶裂解酶。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，更具体地，本发明涉及一种褐藻胶裂解酶基因algp及其制备方法与表达。

背景技术

广袤无垠的海洋占据着地球71％的面积，是一个巨大的宝库，蕴藏的巨量的生物资源。海藻是其中一种重要的海洋植物，它是无机物的天然富集器，也是许多海洋活性物质的制造者。海藻多糖就是海藻中的一大类重要活性物质，目前国际上应用最广泛最多的海藻多糖是褐藻胶，卡拉胶和琼胶。

褐藻胶是源自于褐藻植物的细胞壁的水溶性酸性多糖，其主要由α-L-古罗糖醛酸和β-D-甘露糖醛酸组成。随着研究的发现，褐藻胶的降解产物具有特别的化学活性与生物活性，在医药卫生、食品工业及化妆品行业等均存在巨大的应用价值。制备褐藻胶降解产物有多种方法，如酸法降解、超声降解、氧化降解、酶降解法等。其中酶法降解相较于化学法制备反应温和、易于控制，耗能低，产物回收率较高以及不会产生严重的污染等优点，更多的研究聚焦于酶法降法制备褐藻胶低聚糖。

但是，目前由于大多数产褐藻胶裂解酶的菌株的活性较低，产量较低，阻碍了褐藻胶低聚糖的制备，进一步阻碍了研究与应用的深入进展。

因此，开发活性高、产量高的褐藻胶裂解酶、提高产褐藻胶裂解酶的菌株的活性成为了本技术领域的当务之急。

发明内容

本发明的目的在于提供一种褐藻胶裂解酶基因algp及其制备方法与表达。

在本发明的第一方面，提供一种褐藻胶裂解酶，其是：

(a)SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的多肽；或

(b)将SEQ ID NO:2所示氨基酸序列经过一个或多个(如1-20个；较佳地1-10个；更佳地1-5个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有(a)多肽活性的由(a)衍生的多肽；

(c)氨基酸序列与(a)限定的多肽的氨基酸序列有90％以上(较佳地95％以上；更佳地98％以上；更佳地99％以上)相同性且具有(a)多肽活性的多肽；或

(d)具有(a)多肽功能的SEQ ID NO:2的蛋白片段。

在一个优选例中，所述的褐藻胶裂解酶来源于海洋弧菌(Vibrio sp.)QY102。

在本发明的另一方面，提供一种分离的多核苷酸，该多核苷酸编码所述的褐藻胶裂解酶的多核苷酸。

在一个优选例中，所述的多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

在本发明的另一方面，提供一种表达载体，它含有所述的多核苷酸。

在一个优选例中，所述的表达载体来源于pet28。

在本发明的另一方面，提供一种遗传工程化的宿主细胞，它含有所述的载体，或基因组中整合有所述的多核苷酸。

在一个优选例中，所述的宿主细胞是原核细胞，较佳地为大肠杆菌细胞，更佳地为HMS174(DE3)。

在本发明的另一方面，提供所述的褐藻胶裂解酶的用途，用于酶解褐藻胶。

在本发明的另一方面，提供一种生产褐藻胶裂解酶的方法，包括步骤：

(1)培养所述的宿主细胞，获得培养物；和

(2)从培养物中分离褐藻胶裂解酶。