[发明专利]一种褐藻胶裂解酶基因algp及其制备方法与表达

权利要求书

1.一种褐藻胶裂解酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.一种分离的多核苷酸，该多核苷酸编码权利要求1所述的褐藻胶裂解酶。

3.如权利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

4.一种表达载体，其特征在于，它含有权利要求2所述的多核苷酸。

5.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求4所述的载体，或基因组中整合有权利要求2所述的多核苷酸。

6.权利要求1所述的褐藻胶裂解酶的用途，用于酶解褐藻胶。

7.一种生产褐藻胶裂解酶的方法，其特征在于，包括步骤：

(1)培养权利要求5所述的宿主细胞，获得培养物；和

(2)从培养物中分离褐藻胶裂解酶。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的宿主细胞是大肠杆菌细胞，所述的方法包括：

使所述宿主细胞在5L发酵罐中采用发酵培养基生长，生长到OD₆₀₀＝3±0.5时，开始补稀料，根据溶氧反馈缓慢提升补料速率，待1±0.2L稀料补完换成浓料进行补料；整个发酵过程控制溶氧在30±10％；菌体生长到OD₆₀₀＝40±3时暂停补料，此时溶氧迅速回升，待停补料约10min后进行IPTG诱导，添加IPTG后维持30±5min后再进行补料，待菌体生长缓慢、酶活不再增长后停止发酵；其中，所述的稀料的组分为：蛋白胨20g/L，酵母粉10g/L，甘油60g/L，MgSO₄ 1.25g/L；所述的浓料的组分为：蛋白胨80g/L，酵母粉40g/L，甘油240g/L，MgSO₄ 5g/L，所述各组分的用量在所指定数值基础上在±20％浮动。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的发酵培养基的组分为：酵母粉2g/L，甘油5g/L，泡敌60μl/L，Na₂HPO₄ 6g/L，KH₂PO₄ 3g/L，NH₄Cl 1g/L，NaCl 0.5g/L，MgSO₄ 0.5g/L，CaCl₂溶液2ml/L，微量元素2ml/L；所述各组分的用量在所指定数值基础上在±20％浮动。

10.一种用于酶解褐藻胶的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包含权利要求1所述的褐藻胶裂解酶。