[发明专利]高效液相－串联质谱法检测猪尿中赛庚啶残留量的方法

说明书

技术领域

本发明属于兽医学检验领域，涉及排泄物中药物残留量的分析测定方法。具体涉及赛庚啶残留量的测定方法。

背景技术

盐酸赛庚啶是一种H1受体拮抗药，是合法的人用药品，在临床上主治皮肤瘙痒、荨麻疹、湿疹、过敏性和接触性皮炎、鼻炎、偏头痛、支气管哮喘等疾病。盐酸赛庚啶用于养殖业可以促进动物生长，其具有抗5-羟色胺的作用，可抑制下丘脑的饱觉中枢而刺激食欲增加体重，因此一些畜牧养殖企业将其作为非法饲料添加剂用于促进畜禽生长。赛庚啶在动物体内的残留可对人体健康产生危害。农业部公告《禁止在饲料和动物饮水中使用的物质》中明确规定，禁止使用该类药物作为生产促进剂用于畜禽养殖，同年，农业部公布了“饲料中可乐定和赛庚啶的测定液相色谱－串联质谱法”。目前国外已有对人的血液和尿液中盐酸赛庚啶进行检测的方法报道，主要为高效液相色谱法和液相色谱－串联质谱法，本实验室也曾建立液相色谱－串联质谱法检测饲料中违法添加的盐酸赛庚啶含量的分析方法，但目前国内外尚无动物可食用组织及猪尿中盐酸赛庚啶的检测标准。

发明内容

分散液相微萃取(Dispersiveliqμid－liqμidmicroextraction，DLLME)是2006年由科学家Rezaee首次提出的一种前处理净化技术，与传统的液－液萃取、固－液萃取技术相比，其具有简便、快速、经济的优点，目前正被逐渐引入蔬果中农药多残留检测和人的精神类药物分析领域，将其应用于兽残检测方面的报道较少。

由于二苯拉林的分子结构式和理化性质与赛庚啶相似，且二苯拉林并不存在于自然环境中，因此在目前尚未合成赛庚啶同位素化合物的情况下，本发明选择以盐酸二苯拉林作为盐酸赛庚啶的内标物质，结合分散液相微萃取前处理技术，建立了猪尿中盐酸赛庚啶残留的检测方法。本发明包括以下步骤：

（1）样品预处理

取5mL猪尿样品，加入50μL含100μg/L盐酸二苯拉林的盐酸赛庚啶标准工作溶液，用5%氨水调至pH11.0，再以异丙醇为分散剂，三氯甲烷为萃取剂，在5mL猪尿体系中加入2mL三氯甲烷－异丙醇(5：3)混合提取液和0.75g氯化钠，涡旋振荡5min使其形成水－分散相－提取剂充分混匀的体系。静置后，4℃下8000r/min高速离心5min，吸取下层溶剂至离心管中50℃氮气吹干后，用1mL0.1%甲酸－乙腈(80：20)溶解，过滤，上机测定；

（2）用超高效液相色谱－三重四极杆串联质谱检测，记录色谱图，内标峰高（Hi）与赛庚啶峰高（Hs），用标准曲线换算浓度。

前述的赛庚啶残留量的测定方法，其特征在于该方法是以AgilentSB－C₁₈为色谱柱，以0.1％甲酸、0.1％甲酸乙腈为流动相A、流动相B，流速0.3mL/min；柱温为40℃；检测波长为229nm。

本发明的有益效果是：本发明应用高效液相色谱－串联质谱法检测猪尿中赛庚啶残留量具有较好的准确度与精密度。

附图说明

图1为赛庚啶及盐酸二苯拉林的多反应监测图谱。

具体实施方式

下面将详细说明本发明的具体实施方式：

1.仪器与试剂：

仪器：

超高效液相色谱－串联质谱系统(WatersΜPLC－TQMS，Masslynx工作软件)；高速冷冻离心机；AL204电子天平；减压旋转蒸发仪(B－490，Bμchi)；水浴控温氮吹仪(N－EVAP，Anpel)

试剂：

盐酸赛庚啶标准品(98%，Lot：068k1565)、盐酸二苯拉林标准品(100%，Lot：126h3541)均购于Sigma公司；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(AgilentSB－C18，3.0mm×100mm，1.8μm)；混合型阳离子交换固相萃取柱(WatersMCX，60mg/3mL)；三氯甲烷、异丙醇、二氯甲烷、四氯化碳、1，4-二氧六环、丙酮、四氢呋喃、硝基甲烷、环己烷(分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司)；氨水、高氯酸(分析纯，上海振兴化工厂)；甲酸、乙腈、甲醇(色谱纯，Merk)；去离子水(自制，电阻率＞10MΩ·cm)；高纯氮气、高纯氩气(纯度均为99.999%，上海佳杰特种气体公司)。

2.方法与结果

色谱、质谱条件与系统适应性试验