[发明专利]一种快速高通量检测细菌文库质粒大小的方法

权利要求书

1.一种快速高通量检测细菌文库质粒大小的方法，具体步骤下：

1）菌体悬浮，利用溶液I在离心管中进行菌体悬浮；

溶液I的配方对于革兰氏阴性菌是25mMTris-HCl，25mMEDTA，0.02%m/v溴酚兰；

对于革兰氏阳性菌是0.2%m/v溶菌酶，25mMTris-HCl，25mMEDTA，0.02%m/v溴酚兰；

2）菌体裂解，在步骤1）的离心管中加入溶液II，溶液II的配方是0.3MNaOH，2%m/vSDS混匀后置于70℃水浴锅中水浴15分钟；

3）除蛋白，在步骤2）的离心管中加入溶液III，混匀后，12000rpm离心10分钟，溶液III的配方是苯酚：氯仿：异戊醇按照体积比25：24：1进行配制；

4）进行DNA凝胶电泳，取步骤3）中的离心上清液直接点样进行0.8%的DNA凝胶电泳即可判断重组质粒插入片段的大小。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）中，在1.5ml离心管中加入12.5μl-25μl溶液I，并用灭菌中号移液器吸头从富集培养的平板上挑取10²-10⁵CFU/cm²的1平方厘米的菌体到上述离心管中，振荡器上振荡混匀5秒后，丢掉吸头。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2）中，在步骤1）的离心管中加入6.25μl-12.5μl溶液II，轻轻颠倒混匀5秒。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3）中，在步骤2）的离心管中加入5μl-10μl溶液III，混匀5秒。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤4）中，取步骤3）中的离心上清液10μl直接点样进行0.8%的DNA凝胶电泳，不必加上样缓冲液。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2）中，菌体是革兰氏阳性菌时，先将步骤1）的离心管置于50℃水浴锅中水浴30分钟，再继续加入12.5μl溶液II。