[发明专利]一种茯苓多糖、其制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明属于中药学和免疫学领域，涉及一种茯苓多糖、其制备方法及用途。具体地，本发明还涉及一种药物组合物以及所述茯苓多糖用于制备疫苗佐剂、疫苗组合物或抗体的用途。

背景技术

茯苓(Poria)为非褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)、茯苓属(Poria)、真菌茯苓(Poria cocos)(Schw.)Wolf.的干燥菌核，具有利水渗湿、健脾、宁心之功效(中国药典，2010版，p224)。近年来与本发明领域相关的研究和报道归纳如下：

余建国等(余建国，等.中国兽医科技，2004，34(11)：70-74)给1日龄的雏鸡腹腔注射马立克氏病病毒(MDV)强毒株(0.2mL/只)，并从当日开始给试验组雏鸡以1、2和3mg/只的剂量连续肌肉注射茯苓多糖1周。结果表明3个剂量茯苓多糖均可显著提高雏鸡的淋巴细胞转化率、NK细胞活性及MΦ活性。

张志军等(张志军，等.中国免疫学杂志,2013,29:1213-1216)将含60％茯苓多糖混合物(还含有三萜类化合物、乙酰茯苓酸、茯苓酸、胆碱，3β-羟基羊毛甾三烯酸，葡萄糖、腺嘌呤、组氨酸等，未提及制备方法)按0.4、0.8和1.6mg/鼠的剂量灌胃给予小鼠一周。发现小鼠血清中IgA、IgG和IgM水平高于生理盐水对照组，且存在剂量-效应关系。

谢国秀等(谢国秀，等.生命科学研究，2009,13(3)：246-248)将不同剂量(200μg或1000μg)的茯苓多糖分别与低剂量(0.015μg)或高剂量(1.5μg)流感病毒(A/PR/8)灭活疫苗共同免疫小鼠。一次免疫后3周收集血清，检测血清中IgG、IgG1和IgG2a的抗体水平，并用致死量(40×LD50)流感病毒(A/PR/8)攻击小鼠。结果表明茯苓多糖能增加血清抗体水平，提高小鼠抗致死量流感病毒攻击的能力，其免疫增强效果与氢氧化铝相当。

王青等(王青，等.中国实验方剂学杂志，2011,17(13)：127-130)观察茯苓多糖对卵清白蛋白(OVA)诱导的小鼠肠道黏膜免疫应答的影响。茯苓多糖每天按200mg/kg剂量灌胃给药小鼠，1周后1次性灌胃抗原OVA5mg，对小鼠进行免疫，分别于免疫后1，2，3周，收集小鼠粪便样本，ELISA检测小鼠粪便OVA特异性分泌型免疫球蛋白A(sIgA)。结果表明茯苓多糖对肠道sIgA分泌具有促进作用，这与其活化淋巴结B淋巴细胞有关。

Lee等(Lee等.和汉医药学杂志，1999，16(526)：175-182)在肺炎球菌gV型多糖类蛋白质结合抗原接种小鼠前，预先注射当归多糖和茯苓多糖0.2-1.0mg。结果表明较未用多糖组gvPSIgG与lgM生成明显增加。中药多糖组小鼠用有毒力的19F型肺炎球菌攻击后，血中的细菌迅速清除。用gV型肺炎球菌多糖类蛋白质结合抗原免疫小鼠的脾细胞与中药多糖共育后，TNF-a的生成较对照组高4.0-5.5倍，IL-2高15-39倍，IL-4高4.6－64倍。茯苓多糖还诱导IFN-γ生成增加。

Lee等(Lee,et al.International Immunopharmacology,2004,4:1029-1038)采用1％碳酸钠提取茯苓，获得水提物。水提物经过乙醇沉淀、DEAE-纤维素和Sephadex G-50柱层析，获得一个分子量为8000Da的糖肽(PCSC)，PCSC中糖与肽的百分比为78：22。糖部分含有甘露糖(92％)、半乳糖为6.2％，阿拉伯糖为1.3％。肽部分主要含有天冬氨酸、丝氨酸和缬氨酸。PCSC能显著活化RAW264.7巨噬细胞，活化NF-κB/Rel和NO的分泌。

Chen等(Chen,et al.Food and Chemical Toxicology,2004,42:759-769)从茯苓中分离得到1个中性多糖组分(PC-PS)，分子量为160000Da。PC-PS能抑制人白血病U937细胞和HL-60的增殖和分化，能提高TFN-α和IFN-γ的分泌。

归纳以上研究结果，可以看出茯苓多糖能提高受药动物的体液免疫和细胞免疫能力，但未明确阐明使用的茯苓多糖的具体制备方法和理化性质。

不同的制备方法所获得的茯苓多糖具有本质差别，理化性质往往存在截然不同的区别，生物学活性亦不相同。

目前，尚需要制备新的茯苓多糖。

发明内容

本发明人经过深入的研究和创造性的劳动，得到了一种茯苓多糖。本发明人惊奇地发现，所述茯苓多糖具有良好的疫苗佐剂作用。由此提供了下述发明：