[发明专利]一种鉴别蛙病毒属病毒的三重实时荧光PCR引物、探针和试剂盒

权利要求书

1.一组鉴别蛙病毒属病毒的三重实时荧光PCR引物和探针，其特征在于，所述引物如序列SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：2所示，所述探针如序列SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：5所示。

2.根据权利要求1所述的鉴别蛙病毒属病毒的三重实时荧光PCR引物和探针，其特征在于，所述序列SEQ ID NO：3为鉴别沼泽绿牛蛙虹彩病毒、中华鳖虹彩病毒、虹彩病毒3型、饰纹汀蟾(穴居蛙)虹彩病毒、虎纹蛙病毒、大鲵虹彩病毒、流行性造血器官坏死症病毒、欧洲鮰鱼病毒和欧鲶病毒的探针，并且5′端标记FAM荧光报告基团，3′端标记BHQ1淬灭基团；

所述序列SEQ ID NO：4为鉴别大口黑鲈病毒、裂唇鱼病毒和孔雀鱼病毒6型的探针，并且5′端标记HEX荧光报告基团，3′端标记BHQ1淬灭基团；

所述序列SEQ ID NO：5为鉴别新加坡石斑鱼虹彩病毒的探针，并且5′端标记CY5荧光报告基团，3′端标记BHQ3淬灭基团。

3.如权利要求1或2所述的鉴别蛙病毒属病毒的三重实时荧光PCR引物和探针在制备鉴别蛙病毒属病毒的实时荧光PCR试剂盒中的应用。

4.一种鉴别蛙病毒属病毒的三重实时荧光PCR试剂盒，其特征在于，其包括以下组分：

(1)DNA提取试剂；

(2)PCR反应液：包括如序列表SEQ ID NO:1至SEQ ID NO：2所示的用于鉴别蛙病毒属病毒的引物，如序列表SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：5所示的探针；

(3)Taq DNA聚合酶；

(4)无菌双蒸水；

(5)阴性对照；

(6)阳性对照。

5.根据权利要求4所述的鉴别蛙病毒属病毒的三重实时荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述序列SEQ ID NO：3为鉴别沼泽绿牛蛙虹彩病毒、中华鳖虹彩病毒、虹彩病毒3型、饰纹汀蟾(穴居蛙)虹彩病毒、虎纹蛙病毒、大鲵虹彩病毒、流行性造血器官坏死症病毒、欧洲鮰鱼病毒和欧鲶病毒的探针，并且5′端标记FAM荧光报告基团，3′端标记BHQ1淬灭基团；

所述序列SEQ ID NO：4为鉴别大口黑鲈病毒、裂唇鱼病毒和孔雀鱼病毒6型的探针，并且5′端标记HEX荧光报告基团，3′端标记BHQ1淬灭基团；

所述序列SEQ ID NO：5为鉴别新加坡石斑鱼虹彩病毒的探针，并且5′端标记CY5荧光报告基团，3′端标记BHQ3淬灭基团。

6.根据权利要求4所述的鉴别蛙病毒属病毒的三重实时荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液还包括缓冲液、MgCl₂和dNTP。

7.一种鉴别蛙病毒属病毒的三重实时荧光PCR检测方法，所述方法包括：

(1)用DNA提取试剂同时提取阳性对照、阴性对照以及待测样本中的核酸DNA作为PCR检测模板；

(2)进行PCR反应；

(3)结果判定。