[发明专利]食品中挥发性N-亚硝胺类化合物的全检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品安全领域，具体涉及一种食品中挥发性N-亚硝胺类化合物的全检测方法。

背景技术

N-亚硝胺类化合物属于亚硝基化合物，为剧毒有机化合物，具有致癌、致畸和致突变性等作用，是现今4大食品污染物之一。新鲜的食品中，亚硝胺类化合物的含量很低，但在运输、加工、储存等过程中很容易因缺氧、积热、微生物、霉变等因素产生各种各样的N-亚硝胺化合物；资料显示，食品的来源不同、微生物种类不同、存放的时间不同，产生的N-亚硝胺化合物种类也会不同。最近有科学家用无机还原剂(如：氯化亚铜；CuCl)脱亚硝胺的化学发光法对食品和烟草中亚硝胺化合物进行全检测的案例。然而，食品中的有机成份众多，目前没有一种能快速准确对所有亚硝胺类化合物进行鉴别和跟踪方法。

气相色谱-质谱联用技术结合了气相色谱高效的分离能力和质谱法确定分子结构的能力，灵敏度可以达到10^-8水平，是目前分析和鉴定多组分有机混合物最为有效的检测系统之一。2003年颁布的《食品中N-亚硝胺类化合物的检测》国家标准中，专门针对N-亚硝基二甲胺、N-亚硝基二乙胺、N-亚硝基二丙胺和N-亚硝基吡咯烷共4种亚硝胺类化合物进行检测的“气相色谱-热能分析”和“气相色谱-质谱”方法。更早的时候，使用较普遍的是比色法(分光光度法)检测，该方法样品处理繁琐，类似化合物的干扰大，近年逐步被以气相(或液相)色谱-质谱联用技术为核心的色谱技术方法所取代。综上所述，现有的检测方法存在明显的缺点：

(1)现有的国家标准只针对有限的4种亚硝胺化合物，而已发现的亚硝胺化合物达近300种，有限的4种显然不能代表全部亚硝胺化合物的毒性；

(2)现有的方法利用了气相(或液相)色谱-质谱联用技术在分析有机物方面具有强大的功能，但没有从亚硝胺类化合物本身的结构特征进行考虑，不能有效地将亚硝胺化合物与其它有机物有效区分；

(3)由食品或其他生物材料中分离提取的N-亚硝基化合物，现有的方法容易得出因相伴杂质的干扰而产生的假阳性结果。

(4)现有的方法没有充分利用不同离子源的差异在检测亚硝胺化合物时的价值，如EI和ESI离子源对样品的作用有很大区别；

(5)利用分光光度法进行亚硝基化合物的检测，干扰严重，光度法的选择性较差。

目前主要基于化学方法对食品中亚硝胺化合物进行全检测，并且还多停留在理论研究阶段，还没有一种快速准确的全检测方法。

发明内容

针对现有技术中存在的上述技术问题，本发明利用亚硝胺化合物在EI源质谱中产生独特的NO和N₂O离子信号的原理，提供一种以此双离子信号作为探针建立的食品中挥发性N-亚硝胺类化合物的全检测方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案为：

一种食品中挥发性N-亚硝胺类化合物的全检测方法，包括样品提取、定性分析、定量测定、结果分析及结果换算，具体为：

(1)样品提取

在粉碎好的待检食品中加入超纯水和内标物二氯甲烷，蒸馏并萃取，收集萃取液；然后对萃取液浓缩后进行干燥，再在浓缩液中加入洗涤液进行定容；

(2)定性分析

采用气相色谱-质谱联用仪进行定性分析，气相色谱单元的进样口温度200～250℃，初始温度设定55～60℃，程序升温至230～250℃，氦气作载气，恒压模式进行色谱分离；不分流进样，进样量为1～2μL；质谱单元的离子源采用EI离子源模式，离子源电压为0.70～0.80kV，离子源温度为200～250℃；

上述分析条件经过大量的研究试验得到，此分析条件既能保证分离效果又能节约测试时间，在确保样品中的所有挥发性有机物都能进入色谱柱的同时，保证它们得到充分的分离；通过比较电喷雾电离ESI、负电荷电离CI和电子轰击EI三种离子源筛选出电子轰击EI离子源，并优选了离子源电压和温度，以确保微量成份的检出，避免漏检；通过改变质谱的离子源电压有效区分出N₂O信号，有效排除同位素信号的干扰，因为电压改变能改变N₂O与NO的相对强度，而同位素的相对强度不随电压而变，从而可以排除微量同位素为44的信号对N₂O(M＝44)探针信号的干扰；经过探针信号的辨别，可以区分出亚硝胺化合物与非亚硝胺化合物，确保了准确性；

(3)定量测定

保持与定性分析相同的气相色谱条件，用FID检测器对有机成份进行定量测定；

(4)结果分析