[发明专利]用于荧光原位杂交检测粪肠球菌和/或其他肠球菌的肽核酸探针组及其试剂盒、使用方法、用途

说明书

技术领域

本发明涉及临床关联微生物的检测领域，具体涉及检测粪肠球菌和/或其他肠球菌的肽核酸探针组。

背景技术

肠球菌(Enterococcus)为革兰阳性，成双或短链状排列的球菌、卵圆形，无芽胞，无荚膜，部分肠球菌有稀疏鞭毛。营养要求高，需氧及兼性厌氧菌，最适生长温度35℃。

临床上常见的是粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和屎肠球菌(Enterococcus faecium)，是目前医院内感染的最重要的病原菌之一，少数可分离到鸟肠球菌(Enterococcus avium)、坚忍肠球菌(Enterococcus durans)、铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)等。

肠球菌属为人类肠道正常菌群，在外界环境中亦存在。该类菌可致院内感染，也可致院外感染，尤其是头孢菌素类等的应用、留置导尿、血液及腹膜透析等均为导致肠球菌院内感染的危险因素。尿路感染为肠球菌引起的感染中最为常见，多表现为上、下尿路感染，少数为前列腺炎和肾外周脓肿；心内膜炎感染中肠球菌引起的约占5～15％；肠球菌可与大肠杆菌和脆弱杆菌共同感染腹腔、盆腔，极少数情况单独感染腹腔和盆腔；其他少数情况下肠球菌可致伤口感染、蜂窝织炎、脑膜炎，极少致呼吸道感染。肠球菌引起的心内膜炎、尿路、腹腔、盆腔感染、烧伤后伤口感染等均可成为败血症。败血症为医院重症监护室常见细菌性感染重症，致死率极高。

肠球菌的耐药性分为天然耐药和获得性耐药。对于一般剂量或中剂量氨基糖苷类耐药和对万古霉素低度耐药常是先天性耐药，耐药基因存在于染色体。近年来获得性耐药株不断增多，表现为对氨基糖苷类高水平耐药和对万古霉素、肽可霉素高度耐药。目前，肠球菌的耐药问题包括：(1)耐青霉素和氨苄西林的肠球菌。氨苄西林和青霉素的敏感性可用来预测对阿莫西林、氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林和哌拉西林/他唑巴坦的敏感性。(2)氨基糖苷类高水平耐药(HLAR)的肠球菌。临床微生物实验室一般应用大剂量的庆大霉素和链霉素筛选，其他氨基糖苷类不需进行测试，因为它们对肠球菌的活性并不优于庆大霉素和链霉素，敏感结果预示氨苄西林、青霉素或万古霉素与这种氨基糖苷类抗生素具有协同作用，耐药结果(HLAR)则预示它们之间不存在协同作用。(3)耐万古霉素的肠球菌(VRE)。1988年首次报道出现VRE，目前国内三级甲等以上医院VRE已占分离肠球菌的1％～5％。肠球菌对万古霉素的耐药可分为低水平耐药(MIC为8～32mg/L)和高水平耐药(MIC≥64mg/L)。

肽核酸(peptide nucleic acids，PNA)是1991年由丹麦科学家Nielsen等人设计的一种以中性酰胺键为骨架的全新的DNA模拟物，其骨架结构单元为(2-氨乙基)甘氨酸，碱基部分通过亚甲基羰基连接于主骨架的氨基N上，可以序列特异地与DNA、RNA结合。其骨架为电中性，与DNA-DNA或RNA-DNA互补链相比，PNA-DNA和PNA-RNA互补不存在静电排斥作用，因此具有很高的DNA或RNA亲和性，在无错配的情况下其结合具有高稳定性，且杂交速度快，具有良好的细胞穿透性，是核酸探针的良好选择。

现有的肠球菌检测方法都需要对细菌DNA进行提取，然后再进行PCR扩增，或者对菌液进行扩增，再以扩增产物进行检测，费时费工，步骤繁琐，并且假阳性高，容易造成错判。

发明内容

本发明的目的是提供一种不需要提取DNA，不需要PCR扩增即可检测粪肠球菌和/或其他肠球菌的肽核酸探针组及其试剂盒、方法，高效快捷，假阳性低。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：用于荧光原位杂交检测粪肠球菌和/或其他肠球菌的肽核酸探针组，其特征在于：该肽核酸探针组的DNA序列如SEQ NO：1、SEQ NO：2所示；

其中，所述SEQ NO：1序列是：5’-TTA TCC CCC TCT GAT GGG-3’，用于检测粪肠球菌；

其中，所述SEQ NO：2序列是：5’-TAC TGA TCG GCA GCT-3’，用于检测其他肠球菌；

其中，所述SEQ NO：1序列和SEQ NO：2序列可分别使用，用来分别检测粪肠球菌或其他肠球菌，也可同时使用，用来同时检测粪肠球菌和其他肠球菌。

所述肽核酸探针组能在粪肠球菌和/或其他肠球菌的rRNA、rDNA或互补的rRNA序列中检测靶序列。