[发明专利]用于荧光原位杂交检测粪肠球菌和/或其他肠球菌的肽核酸探针组及其试剂盒、使用方法、用途

权利要求书

1.用于荧光原位杂交检测粪肠球菌和/或其他肠球菌的肽核酸探针组，其特征在于：所述肽核酸探针组的DNA序列如SEQ NO：1、SEQ NO：2所示；

其中，所述SEQ NO：1序列是：5’-TTA TCC CCC TCT GAT GGG-3’，用于检测粪肠球菌；

其中，所述SEQ NO：2序列是：5’-TAC TGA TCG GCA GCT-3’，用于检测其他肠球菌；

其中，所述SEQ NO：1序列或SEQ NO：2序列可分别使用，用来分别检测粪肠球菌或其他肠球菌；也可同时使用，用来同时检测粪肠球菌和其他肠球菌。

2.如权利要求1所述的用于荧光原位杂交检测粪肠球菌和/或其他肠球菌的肽核酸探针组，其特征在于，所述肽核酸探针组能在粪肠球菌和/或其他肠球菌的rRNA、rDNA或互补的rRNA序列中检测靶序列。

3.如权利要求1所述的用于荧光原位杂交检测粪肠球菌和/或其他肠球菌的肽核酸探针组，其特征在于，所述肽核酸探针组中检测粪肠球菌的探针应至少包含86％结构上类似于SEQ NO：1的DNA序列；所述肽核酸探针组中检测其他肠球菌的探针应至少包含86％结构上类似于SEQ NO：2的DNA序列。

4.如权利要求1～3任一所述的用于荧光原位杂交检测粪肠球菌和/或其他肠球菌的肽核酸探针组，其特征在于，所述肽核酸探针组至少连接到一种可检测的级分。

5.如权利要求4所述的用于荧光原位杂交检测粪肠球菌和/或其他肠球菌的肽核酸探针组，其特征在于，所述可检测的级分的类型选自：缀合物、生色团、荧光团、放射性同位素、酶、半抗原或发光化合物。

6.如权利要求5所述的用于荧光原位杂交检测粪肠球菌和/或其他肠球菌的肽核酸探针组，其特征在于，所述荧光团基团是下列中的至少一种：荧光团Alexa系列、Alexa Fluor系列、花青苷、5-(及-6)羧基-2’、7′-二氯荧光素、5-ROX。

7.用于检测粪肠球菌和/或其他肠球菌菌株及药物敏感性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1～6中任一项的探针。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含下列溶液：固定溶液、杂交溶液及药物敏感性检测溶液；

其中，固定溶液包含多聚甲醛和乙醇；

其中，杂交溶液包含曲拉通和甲酰胺；

其中，药物敏感性检测溶液是M-H液体。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述固定溶液包含2～8％的多聚甲醛和25～75％的乙醇；所述杂交溶液的成分及组成是：10％硫酸葡聚糖，10mM NaCl，50％甲酰胺，0.1％焦磷酸钠，0.2％聚乙烯基吡咯啉，0.2％FICOLL，5mM EDTA二钠，0.1％Triton X-100，50mM Tris-HCl。

10.用于检测粪肠球菌和/或其他肠球菌菌株及药物敏感性的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括下列步骤：

(a)固定：将待检样品放入固定溶液中进行固定；

(b)杂交：使肽核酸探针与待检样品在杂交溶液中接触，肽核酸探针与存在于待检样品中的微生物的靶序列杂交；

(c)洗涤：对杂交后的样品进行清洗；

(d)菌种鉴定结果观测；

(e)对数期生长的细胞在设定抗菌药物浓度的M-H液体中振荡培养；

(f)取样固定、杂交、洗涤，观测计数荧光值；

(g)计数荧光比值，确定药物敏感性。

11.如权利要求10所述的使用方法，其特征在于，所述待检样品源于血液、空气、水、食品、活组织检查及其它医学检查。

12.如权利要求11所述的使用方法，其特征在于，其杂交结果通过荧光呈现。

13.如权利要求1～6任一所述的用于荧光原位杂交检测粪肠球菌和/或其他肠球菌的肽核酸探针组的用途，其特征在于，所述肽核酸探针组用于样品中粪肠球菌和/或其他肠球菌的检测。

14.如权利要求7～9任一所述的用于检测粪肠球菌和/或其他肠球菌菌株及药物敏感性的试剂盒的用途，其特征在于，所述试剂盒用于生物学样品中粪肠球菌和/或其他肠球菌的鉴定及其药物敏感性的检测。

15.如权利要求10～12任一所述的使用方法的用途，其特征在于，所述使用方法用于样品中粪肠球菌和/或其他肠球菌的鉴定及其药物敏感性的检测。