[发明专利]纯天然脑蛋白水解物原料制备方法

权利要求书

1.一种纯天然脑蛋白水解物原料制备方法，其特征在于包括如下步骤：

a.纯化蛋白，取冻存新鲜猪脑，解冻，清洗，匀浆，将浆液加入浓盐酸搅匀、然后离心分离，去除上层乳浊液，收集沉淀物，即得沉淀脑蛋白；

b.胃蛋白酶酶解，将经上述步骤得到的沉淀蛋白加水匀浆，然后加入胃蛋白酶搅拌，再加入浓盐酸搅拌，然后离心分离，收集上清液，即得胃酶酶解液；

c.酸水解，将经上述步骤所得胃酶酶解液加入硫酸进行水解，得酸水解液；

d.胰蛋白酶酶解，将经上述步骤所得酸水解液调pH值至7-9，加入猪脑重量0.1-0.4%的胰酶进行水解，再离心分离，即得胰酶酶解液；

e.层析，将经上述步骤所得胰酶酶解液调pH值为6.5-7.5，再用氨水解析，即得层析液；

f.浓缩，将经上述步骤所得层析液真空浓缩，调pH值至6.5-7.5，然后冻结保存；

g.去杂质，将经上述步骤所得浓缩冰冻液解冻，然后离心分离，收集上清液，将上清液超滤，即得天然脑蛋白水解物原料。

2.根据权利要求1所述的纯天然脑蛋白水解物原料制备方法，其特征在于：所述纯化蛋白步骤，取冻存新鲜猪脑，加水浸泡自然解冻，再用水清洗，然后加入猪脑重2-4倍重量的纯化水用胶体磨匀浆15min，将匀浆所得浆液倒入提取罐中加热至70-100℃后保温10-30min，再按猪脑重每1kg加入2-5 ml的比例加入浓度为12mol/L的浓盐酸搅匀、冷却至10-50℃，再以3000-4000r/min的速度离心分离，然后去除上层乳浊液，收集沉淀物，即得沉淀脑蛋白。

3.根据权利要求1所述的纯天然脑蛋白水解物原料制备方法，其特征在于：所述胃蛋白酶酶解步骤，将经纯化蛋白步骤得到的沉淀蛋白按猪脑与水的重量比1:1-3的比例加纯化水，匀浆15min，倒入提取罐中，加热升温至30-50℃，然后加入猪脑重1-2%的胃蛋白酶搅拌10-15min，再按猪脑重每1kg加7-9 ml的比例加入浓度为12mol/L的浓盐酸搅拌1-4小时后静置保温1-3小时，然后以3000-4500r/min的速度离心分离，收集上清液，即得胃酶酶解液。

4.根据权利要求1所述的纯天然脑蛋白水解物原料制备方法，其特征在于：所述酸水解步骤，将经胃蛋白酶酶解步骤所得胃酶酶解液加入浓度为18.4mol/L的浓硫酸进行水解，酶解液与浓硫酸的体积比为1:62.5-750，加热至80-121℃，水解3-6h，然后冷却至30-40℃，即得酸水解液。

5.根据权利要求1所述的纯天然脑蛋白水解物原料制备方法，其特征在于：所述胰蛋白酶酶解步骤，将经酸水解步骤所得酸水解液加热至30-50℃，用6mol/L氢氧化钠溶液调pH值至7-9，加入猪脑重量0.1-0.4%的胰酶进行水解3-8小时，再加热至70-100℃,然后保温10-30min，再冷却至10-50℃，再用300目滤网过滤，然后以3000-4500r/min的速度离心分离，即得胰酶酶解液。

6.根据权利要求1所述的纯天然脑蛋白水解物原料制备方法，其特征在于：所述层析步骤，将经胰蛋白酶酶解步骤所得胰酶酶解液过阳离子交换柱，然后用纯化水冲洗至pH值为6.5-7.5，再用1.8-2mol/L氨水解析，即得层析液。

7.根据权利要求1所述的纯天然脑蛋白水解物原料制备方法，其特征在于：所述浓缩步骤，将经上述步骤所得层析液以60-90℃条件下真空浓缩至猪脑重的30%，然后用6mol/L盐酸溶液调pH值至6.5-7.5， 在24小时内冷却至0-10℃，然后在-20℃中冻结保存。

8.根据权利要求1所述的纯天然脑蛋白水解物原料制备方法，其特征在于：所述去杂质步骤，将经层析步骤所得浓缩冰冻液，自然解冻，然后以3000-4500r/min的速度离心分离，收集上清液，将上清液用8000道尔顿分子量膜进行超滤，即得天然脑蛋白水解物原料。