[发明专利]一种制备扫描电镜用寄生虫样品的环氧树脂包埋方法

权利要求书

1.一种制备扫描电镜用寄生虫样品的环氧树脂包埋方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，样品前期处理：将寄生虫活体迅速杀死后包裹于定性滤纸中； 

步骤二，样品固定：将样品置于戊二醛中固定2～4小时，然后使用PBS缓冲液将样品表面清洗干净，除去戊二醛，再用锇酸固定，将寄生虫熏成黑色；

步骤三，样品清洗和梯度脱水：使用PBS缓冲液将样品表面清洗干净，除去锇酸，然后用体积浓度为30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％、100％、100％的丙酮作梯度脱水；

步骤四，置换：寄生虫脱水后采用环氧树脂包埋剂与丙酮的混合液中浸渍包埋；

步骤五，清洗：将环氧树脂包埋剂浸渍后的寄生虫挑出放到网眼小于寄生虫体的筛网上，在70℃条件下聚合3～5小时，自然冷却至室温后用丙酮清洗，直到线虫表面变为无光泽为止，再在70℃条件下聚合12～24小时；

步骤六，样品镀膜：将聚合好的样品台用离子溅射仪喷金90 ~ 120s，在寄生虫样品表面均匀镀上一层导电的金膜，即完成寄生虫扫描电镜样品的制备。

2.根据权利要求1所述的制备扫描电镜用寄生虫样品的环氧树脂包埋方法，其特征在于，步骤一中活体寄生虫在试管中于60℃、 3~5分钟条件下迅速杀死。

3.根据权利要求1所述的制备扫描电镜用寄生虫样品的环氧树脂包埋方法，其特征在于，步骤二中戊二醛的质量浓度为2％。

4.根据权利要求1所述的制备扫描电镜用寄生虫样品的环氧树脂包埋方法，其特征在于，步骤二中锇酸的质量浓度为1％。

5.根据权利要求1所述的制备扫描电镜用寄生虫样品的环氧树脂包埋方法，其特征在于，步骤四中置换包埋为将寄生虫充分脱水后转入体积比为1:3的环氧树脂包埋剂与丙酮的混合液中浸渍2小时，然后转入体积比为1:1的环氧树脂包埋剂与丙酮的混合液中浸渍4小时，再转入体积比为3:1的环氧树脂包埋剂与丙酮的混合液中浸渍6小时，最后转入纯环氧树脂包埋剂中浸渍8~12小时。

6.根据权利要求1所述的制备扫描电镜用寄生虫样品的环氧树脂包埋方法，其特征在于，所述的寄生虫是：样品相对较小，形态易变，体内无脊椎骨骼支撑的扁形动物门或者原生动物门。