[发明专利]冬虫夏草中国被毛孢磷脂酶C、编号基因及其应用

权利要求书

1.一种冬虫夏草中国被毛孢磷脂酶C，其特征在于所述磷脂酶C的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.如权利要求1所述的磷脂酶C在生物催化磷脂生成磷酸胆碱和甘油二酯中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用为：将含磷脂酶C基因的重组工程菌经诱导培养后的湿菌体用pH8.0磷酸盐缓冲液悬浮，超声破碎后，将破碎混合液离心，取上清液为催化剂，以磷脂溶液为底物，于pH值为7.0的缓冲液中，37℃下反应，反应结束后，将反应液离心，获得含磷酸胆碱和甘油二酯的混合液；所述磷脂溶液按如下步骤制备：将大豆磷脂用丙酮洗涤，真空脱溶后，获得无油大豆磷脂；将无油大豆磷脂、质量浓度0.5％聚乙烯醇水溶液溶于pH值7.0的缓冲液中，在10000r/min的条件下均质3min，得到磷脂溶液；所述0.5％聚乙烯醇水溶液的体积用量以无油大豆磷脂质量计为3.33mL/g，所述磷脂溶液中无油大豆磷脂的终浓度为50g/L。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述磷脂溶液的用量以无油大豆磷脂质量计，所述无油大豆磷脂的初始浓度为48g/L，所述催化剂的用量以超声破碎前湿菌体的质量计，终浓度为0.9g/L。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述催化剂按如下方法制备：将含磷脂酶C基因的重组工程菌接种于含终浓度50μg/ml的Kan抗性的LB液体培养基中，37℃、250r/min培养过夜，取培养物，以体积浓度2％的接种量转接于50mL含有50μg/ml Kan抗性的LB液体培养基中，37℃、250r/min培养至菌体浓度OD600为0.6～0.8，向培养物中加入终浓度0.05mmol/L的IPTG诱导培养8h，收集湿菌体，将湿菌体在功率40％、破1s停1s条件下超声破碎，离心，取上清液即为催化剂。

6.一种编码权利要求1所述磷脂酶C的基因。

7.如权利要求6所述的基因，其特征在于所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

8.如权利要求6或7所述的基因在构建能够生物催化磷脂生成磷酸胆碱和甘油二酯的基因工程菌中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于所述的应用为：构建含有所述磷脂酶C基因的重组载体，将所述重组载体转化至大肠杆菌中，获得的重组基因工程菌进行诱导培养，培养液分离纯化获得含有磷脂酶C基因的菌体细胞。