[发明专利]一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙有关物质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及醋酸阿比特龙及中间体有关物质的分析方法，特别是一种醋酸阿比特龙有关物质的高效液相色谱梯度法测定方法，属于药物合成分析领域。

背景技术

醋酸阿比特龙是一种CYP17抑制剂，临床适用于与泼尼松联用为治疗既往接受含多烯紫杉醇化疗转移去势难治性前列腺癌患者。分子式为C₂₆H₃₃NO₂，分子量为391.55，化学名称为(3β)-17-(3-吡啶基)-雄甾-5,16-二烯-3-醇醋酸酯。醋酸阿比特龙主要杂质有6种，其在醋酸阿比特龙合成过程中生成，在原料和制剂储藏过程中也主要产生阿比特龙和阿比特龙环氧化物杂质，而阿比特龙和阿比特龙环氧化物两种杂质之间结构和极性相似，用一般的方法难于完全分离，本法通过系列的科学试验采用普通的C18柱和常规的试剂快速准确地实现了醋酸阿比特龙有关物质的测定，特别是能使阿比特龙和阿比特龙环氧化物完全分离，从而实现了醋酸阿比特龙原料、中间体及制剂的杂质的控制，保证了醋酸阿比特龙原料及制剂的质量可控，具有现实的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙、醋酸阿比特龙粗品和醋酸阿比特龙制剂有关物质的方法。本发明的高效液相色谱梯度法不仅可对杂质，如酮类杂质、乙酰化阿比特龙、消除产物和双甾体杂质进行准确测定，还可对阿比特龙和阿比特龙环氧化物等杂质进行准确测定。

本发明的技术方案为：

一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙待测样品中有关物质的方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

(1)制备标准品溶液，以所述标准品溶液在下述色谱条件下进行系统适用性试验，检定检测系统；

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以有机相为流动相B，以缓冲液和流动相B的混合物为流动相A，梯度洗脱，柱温为30～40℃，优选40℃，流速为1.1～1.3ml/min，优选1.2ml/min，检测波长为254nm；

标准品溶液的制备：分别取杂质酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物、双甾体杂质及醋酸阿比特龙对照品，精密称定，加溶剂[甲醇-乙腈(体积比为50:50)]制成每1ml中分别含酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物和双甾体杂质各0.01mg及醋酸阿比特龙1mg的混合溶液；精密量取10μl所述混合溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，校定检测系统至醋酸阿比特龙主峰与相邻杂质峰及杂质与杂质峰的分离度应大于1.5，理论板数按醋酸阿比特龙计算应不低于20000；

(2)供试品溶液和对照品溶液的制备

取醋酸阿比特龙待测样品，加溶剂[甲醇-乙腈(体积比为50:50)]制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液；取醋酸阿比特龙对照品，加溶剂[甲醇-乙腈(体积比为50:50)]制成每1ml中含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)通过高效液相色谱测定待测样品中有关物质的含量

以对照品溶液注入经上述步骤(1)校定后的液相色谱仪，调节检测灵敏度，再将供试品溶液注入液相色谱仪，在步骤(1)所述的色谱条件下进行高效液相色谱，记录色谱图至约醋酸阿比特龙主峰保留时间的2.5倍，按外标法以对照品溶液主峰面积计算，供试品溶液中酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物和双甾体杂质不得过0.1％，总杂质不得过1.0％；

(4)计算待测样品中各杂质的含量。

进一步地，所述杂质中酮类的结构式为阿比特龙环氧化物的结构式为消除产物的结构式为双甾体杂质的结构式为

进一步地，步骤(1)所述梯度洗脱中，流动相A比例的变化范围为于0～30分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从100％变化为20％，流动相B的比例从0％变化为80％，于30～40分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从20％变化为0％，流动相B的比例从80％变化为100％，于40～45分钟，等度洗脱，流动相A的比例保持0％不变，流动相B的比例保持100％不变，于45～46分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从0％变化为100％，流动相B的比例从100％变化为0％，于46至52分钟，流动相A和B回到初始比例，色谱柱重新平衡。

进一步地，步骤(1)所述的流动相B为甲醇和乙腈的混合物，甲醇与乙腈的比例为体积比10～40∶90～60。