[发明专利]一种基于酶联免疫分析的HPV核酸检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种基于酶联免疫分析的HPV16型E6、E7RNA检测试剂盒，其特征是试剂盒的组成部分为：

(1)预包被的酶标板：PLL处理的聚苯乙烯微孔板，BSA封闭，储藏条件为4℃，保质期半年；

(2)探针混合液1：针对HPV16E6RNA片段的探针组合，E6DNA1、E6DNA2、E6DNA3，浓度均为10uM；

(3)探针混合液2：针对HPV16E7RNA片段的探针组合，E7DNA1、E7DNA2，浓度均为10uM；

(4)10×退火缓冲液：Tris-HCl100mM，pH7.5，EDTA10mM，NaCl1M；

(5)针对DNA-RNA的鼠源单克隆抗体Sdr溶液；

(6)针对Sdr的酶标二抗溶液；

(7)底物显色溶液：TMB溶液；

(8)洗涤缓冲液：10×PBS溶液；

(9)反应终止液：2M H₂SO₄。

2.根据权利要求1所述试剂盒用于体外转录RNA模板或直接从病样中提取的RNA的检测方法，其特征是由以下步骤构成：

(1)将体外转录RNA模板或直接从病样中提取的RNA与探针混合液1或2进行杂交，杂交体系：10uL10×退火缓冲液，3uL或2uL探针混合液，RNA模板溶液10uL，补充DEPC H₂O至100uL；杂交条件：95℃5min，65℃2h，冰上冷却5min；

(2)预包被的酶标板中，每孔加入100uL杂交产物，室温孵育1h，300uL PBST洗5次；每孔加入100uL Sdr单克隆抗体溶液，室温孵育1h，如上洗涤；每孔加入100uL酶标二抗溶液，室温孵育1h，如上洗涤；加入100uL TMB底物显色溶液，37℃孵育20min；每孔加入50uL反应终止液终止反应，测Abs值，测量波长450nm，参比波长570nm。

3.根据权利要求1所述试剂盒在高危HPV16型人乳头瘤病毒检测中的应用。