[发明专利]一种沙门氏菌血清型鉴定方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种沙门氏菌血清型鉴定方法，其特征在于，包括步骤：

1)提取待检测样品中的DNA；

2)将步骤1)获得的DNA作为模板，进行PCR检测；其中，PCR检测的靶标为沙门氏菌CRISPR1和CRISPR2；

3)将步骤2)中的PCR产物进行序列测定；

4)借助在线免费软件CRISPRfinder，寻找对应CRISPR位点的前三个间隔序列，并与各血清型标准间隔序列进行同源比对；

5)比对结果的判断：样品的CRISPR1和CRISPR2的间隔序列分别与某一标准血清型的CRISPR1和CRISPR2间隔序列至少有两个一致则判定为对应的血清型；

其中，蒙得维亚沙门氏菌和伤寒沙门氏菌只需比对CRISPR1基因的前三个间隔序列即可。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中检测CRISPR1所用的引物为：CRISPR1-F：5'-ATAATGCTGCCGTTGGTAA-3'和CRISPR1-R：5'-TTGAT GAGTATGGTGGTTGTGGT-3'。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中检测CRISPR2所用的引物为：CRISPR2-F：5'-CTGTATAAAAGCCTCCCC-3'和CRISPR2-R：5'-GTTGGTAGAATGTGGTGC-3'。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中检测CRISPR1所用PCR的扩增条件为：95℃预变性10min，95℃变性1min，60.5℃退火1min，72℃延伸1min，进行35个循环，最后72℃延伸10min。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中检测CRISPR2所用PCR的扩增条件为：95℃预变性10min，95℃变性1min，52℃退火1min，72℃延伸1min，进行35个循环，最后72℃延伸10min。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述沙门氏菌为以下23种中的一种：鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)、肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis)、婴儿沙门氏菌(Salmonella Infantis)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella Choleraesuis)、慕尼黑沙门氏菌(Salmonella Muenchen)、山夫登堡沙门氏菌(Salmonella Senftenberg)、蒙得维亚沙门氏菌(Salmonella Montevideo)、布伦登卢沙门氏菌(SalmonellaBraenderup)、斯坦利沙门氏菌(Salmonella Stanly)、汤卜逊沙门氏菌(Salmonella Thompson)、阿贡那沙门氏菌(Salmonella Agona)、鸭沙门氏菌(Salmonella Anatum)、鸡白痢沙门氏菌(Salmonella Pollorum)、德尔比沙门氏菌(Salmonella Derby)、圣保罗沙门氏菌(Salmonella Saintpaul)、印第安纳沙门氏菌(Salmonella Indiana)、甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella Paratyphi A)、田纳西沙门氏菌(Salmonella Tennessee)、火鸡沙门氏菌(Salmonella Meleagridis)、科特布斯沙门氏菌(Salmonella Kottbus)、爪哇那沙门氏菌(Salmonella Javiana)、伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhi)和塞罗沙门氏菌(Salmonella Cerro)。

7.一种沙门氏菌血清型检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于PCR扩增沙门氏菌CRISPR1和CRISPR2的引物。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述引物为检测CRISPR1所用的PCR引物CRISPR1-F：5'-ATAATGCTGCCGTTGGTAA-3'和CRISPR1-R：5'-TTGAT GAGTATGGTGGTTGTGGT-3'，检测CRISPR2所用的PCR引物CRISPR2-F：5'-CTGTATAAAAGCCTCCCC-3'和CRISPR2-R：5'-GTTGGTAGAATGTGGTGC-3'。