[发明专利]一种高效固定化脂肪酶的制备方法

权利要求书

1.一种高效固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于，分别用磷酸盐缓冲溶液溶解脂肪酶和经预处理的大孔吸附树脂，再将脂肪酶溶液加入到大孔吸附树脂溶液中震荡均匀后，进行吸附处理，吸附后再加入戊二醛溶液进行固定处理，固定后经真空抽滤、洗涤和干燥后得到固定化脂肪酶。

2.权利要求1所述方法，其特征在于，步骤如下：

1)大孔吸附树脂的预处理：将大孔吸附树脂加入到乙醇溶液中胀润，用去离子水洗涤后，再用分别用酸和碱交替处理树脂，蒸馏水冲洗至中性后，干燥，获得预处理大孔吸附树脂；

2)磷酸盐缓冲溶液的溶解：用磷酸盐缓冲溶液浸泡步骤1)所得预处理大孔吸附树脂，再用磷酸盐缓冲溶液溶解脂肪酶，获得脂肪酶溶液；

3)吸附处理：将步骤2)所得脂肪酶溶液加入到经预处理的大孔吸附树脂磷酸盐溶液中，震荡混合后吸附处理，获得吸附树脂脂肪酶溶液；

4)交联处理：向步骤3)所得吸附树脂脂肪酶溶液中加入戊二醛溶液进行固定化处理，处理完后进行真空抽滤，用去离子水洗涤后干燥，得到固定化脂肪酶。

3.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤1)中所述大孔吸附树脂为NKA-9大孔吸附树脂；所述乙醇溶液浓度为90-95％，胀润时间为23-25h；所述用酸和碱交替处理是用4-5％的盐酸和1-2％的氢氧化钠溶液每处理4-5h交替；所述干燥，温度为37-40℃，时间为12-15h。

4.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤2)中所述磷酸盐缓冲溶液pH为6.7-7.0，浓度为0.05M；所述脂肪酶的添加量为34-35mg/100mg载体。

5.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤3)中所述吸附处理，吸附温度为40-45℃，吸附时间为4.0-4.5h，在吸附处理过程中每隔5-10min进行震荡混匀。

6.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤4)中所述戊二醛溶液浓度为0.25-0.75％；所述固定化处理，固定时间为2-3h；所述干燥，干燥温度为37-40℃，干燥时间12-15h。

7.权利要求2所述方法，其特征在于，具体步骤如下：

1)称取500mg的NKA-9树脂，加入95％乙醇溶液浸泡胀润24h，用去离子水洗涤去除杂质，再分别用5％盐酸和2％氢氧化钠溶液处理NKA-9树脂，每处理4h交替，交替处理1次，再用蒸馏水冲洗至中性后，于37℃干燥15h，获得预处理NKA-9树脂；

2)取100mg步骤1)所得的预处理NKA-9树脂，用pH6.50.05M的磷酸盐缓冲溶液溶解，再取34.6mg脂肪酶用pH6.50.05M的磷酸盐缓冲溶液溶解，获得脂肪酶溶液；

3)将步骤2)所得脂肪酶溶液加入到预处理NKA-9树脂磷酸盐溶液中，震荡混合均匀后，在45℃恒温水浴中吸附处理4.1h，处理期间每隔10min进行震荡混匀，吸附处理后获得吸附树脂溶液；

4)向步骤3)所得吸附树脂溶液中加入0.5％的戊二醛溶液3ml，交联固定2.5h，真空抽滤后用去离子水洗涤，37℃干燥15h得到固定化脂肪酶。