[发明专利]一种利用糖脂制备CIK细胞的方法

权利要求书

1.一种CIK细胞的制备方法，其特征在于，所述的制备方法是在CIK细胞制备的过程中，首先在培养液中添加α1-Galactosylceramide糖脂，然后再添加α2-Galactosylceramide糖脂进行活化和增殖。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的方法包括有如下的步骤：

1)首先把人体外周血单个核细胞按照1～2×10⁶个/ml的浓度悬浮于细胞培养液中；

2)在步骤1)的细胞培养液中加入重组人IFN-γ及α1-Galactosylceramide糖脂，在37℃、5％CO₂培养箱中培养24小时；

3)然后在细胞培养液中加入CD₃单克隆抗体，重组人IL-2和α2-Galactosylceramide糖脂进行培养；

4)在培养至第8天再次补充添加重组人IL-2和α2-Galactosylceramide糖脂；再培养两周后收获CIK细胞。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述的步骤1)的细胞培养液中加入1000U/ml的重组人IFN-γ及50ng/ml的KRN8000。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述的步骤3)的细胞培养液中加入50ng/ml的CD₃单克隆抗体，300U/ml的重组人IL-2和50ng/ml的KRN9000。

5.如权利要求2-4任一项所述的方法，其特征在于所述的培养液，其配方组成如下：

无水氯化钙200mg/L、硝酸铁0.1mg/L、氯化钾400mg/L、无水硫酸镁97.67mg/L、氯化钠6400mg/L、无水磷酸二氢钠125mg/L、L-盐酸精氨酸84mg/L、L-盐酸胱氨酸63mg/L、L-谷氨酰胺584mg/L、甘氨酸30mg/L、L-盐酸组氨酸42mg/L、L-异亮氨酸105mg/L、L-亮氨酸105mg/L、L-盐酸赖氨酸146mg/L、L-甲硫氨酸30mg/L、L-苯丙氨酸66mg/L、L-丝氨酸42mg/L、L-苏氨酸95mg/L、L-色氨酸16mg/L、L-酪氨酸钠盐104mg/L、L-缬氨酸94mg/L、D-泛酸钙4mg/L、氯化胆碱4mg/L、叶酸4mg/L、肌醇7.2mg/L、烟酰胺4mg/L、核黄素0.4mg/L、盐酸硫胺4mg/L、盐酸吡哆辛4mg/L、葡萄糖1000mg/L、丙酮酸钠110mg/L、酚红15mg/L。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述的步骤3)中CD₃激发型单抗优选用克隆号为OKT3的激发型单抗。