[发明专利]一种鲤疱疹病毒检测试剂盒及其检测方法有效
| 申请号： | 201410282525.9 | 申请日： | 2014-06-23 |
| 公开（公告）号： | CN104032037A | 公开（公告）日： | 2014-09-10 |
| 发明（设计）人： | 潘晓艺;沈锦玉;蔺凌云;袁雪梅;郝贵杰;徐洋;姚嘉赟;尹文林 | 申请（专利权）人： | 浙江省淡水水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州浙科专利事务所(普通合伙) 33213 | 代理人： | 吴秉中 |
| 地址： | 313001 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 疱疹病毒 检测 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种鲤疱疹病毒检测试剂盒，其特征在于该检测试剂盒包括10×反应缓冲液、1U/μL的 Taq酶、各10μM的引物组P1F/P1R、各10μM的引物组P2F/P2R、纯水和15μg/mL的阳性DNA；
所述的10×反应缓冲液为：Tris-HCl 100mM、KCl 500mM、MgCl2 20mM和dNTPs 2.5mM；
所述的引物组P1F/P1R中：上游引物P1F序列如SEQ ID NO：1所示,下游引物P1R序列如SEQ ID NO：2所示；
所述的引物组P2F/P2R中：上游引物P2F序列如SEQ ID NO：3所示,下游引物P2R序列如SEQ ID NO：4所示。
2.一种利用如权利要求1所述的鲤疱疹病毒检测试剂盒检测鲤疱疹病毒的方法，其特征在于：
以检测样品的DNA为模板，以引物组P1F/P1R进行PCR扩增，当样品所含病毒DNA量过低而未见扩增核酸条带时，再以第一轮PCR扩增产物为模板，采用引物组P2F /P2R进行第二轮PCR；当第一轮PCR扩增产物在1213bp处出现一条特异性核酸带或是第二轮PCR扩增产物在952bp处出现一条特异性核酸带时，判断为样品中含有鲤疱疹病毒DNA。
3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于所述的第一轮和第二轮PCR反应条件为：95℃预变性3min，94℃变性30s, 58℃复性30s，72℃延伸l min，循环33次，最后72℃延伸8min。
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