[发明专利]一种密码子植物化改造的PMI基因及其应用有效
申请号: | 201410276408.1 | 申请日: | 2014-06-19 |
公开(公告)号: | CN104046636B | 公开(公告)日: | 2017-03-15 |
发明(设计)人: | 李莉;杨剑波;魏鹏程;宋丰顺;李浩;杨亚春;倪大虎;汪秀峰;马卉;秦瑞英;陆徐忠;倪金龙 | 申请(专利权)人: | 安徽省农业科学院水稻研究所 |
主分类号: | C12N15/31 | 分类号: | C12N15/31;C12N15/82;A01H5/00 |
代理公司: | 北京律谱知识产权代理事务所(普通合伙)11457 | 代理人: | 黄云铎 |
地址: | 230031 *** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 密码子 植物 改造 pmi 基因 及其 应用 | ||
1.一种密码子植物化改造的PMI基因,其特征在于,该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种表达盒,其特征在于,所述表达盒中包含权利要求1所述的PMI基因。
3.一种表达载体,其特征在于,所述表达载体包含权利要求1所述的PMI基因或权利要求2所述的表达盒。
4.一种权利要求1-3所述的基因、表达盒或载体的应用,其特征在于,所述应用包括利用所述密码子植物化改造的PMI基因作为筛选标记,获得转基因植物或植物部分。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述植物包括:粮食作物、蔬菜作物、花卉作物、能源作物。
6.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述植物部分包括:细胞、原生质体、细胞组织培养物、愈伤组织、细胞块、胚芽、花粉、胚珠、花瓣、花柱、雄蕊、叶、根、根尖、花药和种子。
7.一种利用含有权利要求1中所述的密码子植物化改造的PMI基因的表达载体pCAMBIA1381-plant PMI,将外源基因导入水稻细胞的方法,包括下述步骤:
(1)将水稻种子去壳、灭菌后将胚分离出来,置于愈伤组织诱导培养基上以产生次级愈伤组织;
(2)将所述次级愈伤组织转移至新的愈伤组织诱导培养基进行预培养,获得愈伤组织;
(3)将步骤(2)中获得的愈伤组织与农杆菌接触15分钟,其中,所述农杆菌中引入了所述表达载体,所述表达载体中携带所述密码子植物化改造的PMI基因;
(4)将步骤(3)处理后的愈伤组织转移到其上垫有无菌滤纸的培养皿中,21-23℃培养48小时;
(5)将步骤(4)处理后的愈伤组织置于前筛选培养基上培养5-7天;
(6)将步骤(5)处理后的愈伤组织转移筛选培养基上,以获得抗性愈伤组织;
(7)将所述抗性愈伤组织转移到分化再生培养基中分化成苗;和
(8)将步骤(7)中所获得的苗转移到生根培养基中生根。
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