[发明专利]一种虫草抗菌肽及其制备方法

权利要求书

1.一种虫草抗菌肽，其特征在于，所述虫草抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种根据权利要求1所述的虫草抗菌肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤A：将蛹虫草菌株斜面菌种接入到萨氏琼脂改良固体培养基中，培养至产生斜面孢子；利用无菌水将得到的所述斜面孢子洗下，并转接到三角瓶中，振荡培养，得到孢子悬液；

步骤B：将所述孢子悬液转接到萨氏液体培养基中，恒温振荡培养之后静置、过滤，得到菌丝体；

步骤C：将所述菌丝体烘干至粉末状后加入蒸馏水，提取过夜后过滤，得到滤液；

步骤D：将所述滤液进行旋转蒸发浓缩，并同时加入饱和硫酸铵溶液，静置后离心，得到第一浓缩液，在所述第一浓缩液中再次加入饱和硫酸铵溶液，得到预定饱和度的第二浓缩液，将所述第二浓缩液离心，得到沉淀样品，在所述沉淀样品中加入蒸馏水进行溶解，得到样品溶解液；将所述样品溶解液利用蒸馏水透析后冷冻干燥，得到粗蛋白样品；

步骤E：将所述粗蛋白样品利用CM-52阳离子交换柱进行洗脱，得到洗脱组份，再将洗脱组份透析后进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，得到13KD的蛋白质条带；

步骤F:切下所述蛋白质条带，并进行液质联用质谱检测，得到质谱数据，并进行分析，得到虫草抗菌肽及其序列。

3.根据权利要求2所述的虫草抗菌肽的制备方法，其特征在于，在步骤A中：所述萨氏琼脂改良固体培养基，按照重量份数计，其有效组份包括：

麦芽糖4-6份、蛋白胨8-12份、酵母膏4-6份、琼脂18-22份、葡萄糖18-22份、水900-1100份。

4.根据权利要求3所述的虫草抗菌肽的制备方法，其特征在于，在步骤A中：

所述将蛹虫草菌株斜面菌种接入到萨氏琼脂改良固体培养基中，培养至产生斜面孢子具体包括：

将蛹虫草菌株斜面菌种接入到萨氏琼脂改良固体培养基中，在25℃±1℃培养4-5天。

5.根据权利要求4所述的虫草抗菌肽的制备方法，其特征在于，在步骤B中：

所述孢子悬液与所述萨氏液体培养基的体积比为1:10；

所述恒温振荡培养的条件包括：培养温度为25-27℃，培养时间为4-5天，转速为180-220r/min；

所述静置的时间为6-12小时。

6.根据权利要求2-5任一项所述的虫草抗菌肽的制备方法，其特征在于，在步骤C中，具体包括：称取干燥菌丝体粉末，按质量比为1:8-14的比例加入蒸馏水，并在4℃提取过夜，过滤后，得到所述滤液。

7.根据权利要求6所述的虫草抗菌肽的制备方法，其特征在于，在步骤D中：

所述将所述第二浓缩液离心，得到沉淀样品具体包括：将所述第二浓缩液静置后在8000r/min的转速下离心18-22分钟，除去上清液，得到所述沉淀样品。

8.根据权利要求7所述的虫草抗菌肽的制备方法，其特征在于，在步骤E中的所述SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中：

浓缩胶的浓度为10-16％、分离胶的浓度为4-5％、染色液为考马斯亮蓝R-250。