[发明专利]一种具有抗癌活性的黑根霉多糖及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有抑制BGC-823细胞生长活性的黑根霉菌丝多糖及其应用，属于生物医药技术领域。

背景技术

随着世界总人口持续增长和人口老龄化的加剧，以及逐年增多的患癌高危行为，使得全球癌症患者数量急剧增加。据美国癌症协会(ACS)统计数据显示，2008年全球约有760万癌症患者死亡，其中胃癌死亡病例达74万，中国每年约有23万人死于胃癌。不合理饮食和幽门螺旋杆菌感染是导致胃癌的重要原因。在我国山东省临朐县、辽宁省庄河县、福建省长乐县最具代表性的胃癌高发地区。

大部分胃癌患者在确诊时已处于晚期阶段并往往伴发多种疾病，使得胃癌的治愈尤为困难。手术合并化学疗法是胃癌治疗的主要手段，但是化疗药物会导致严重的副作用，迫切需要寻找高效、低毒的新型肿瘤治疗药物。

多糖是由10个以上的单糖通过糖苷键连接形成的含醛基或酮基的多羟基聚合物及其衍生物。天然功能性多糖作为一类重要的生物活性物质，具有抗肿瘤、免疫调节、抗病毒、抗氧化等多种功能。天然活性多糖的细胞毒性小、免疫原性极低、安全性高，是开发癌症治疗药物的重要来源。目前，已有多种抗肿瘤辅助多糖药物作为辅助治疗肿瘤的药物在临床应用，如香菇多糖、云芝多糖等。

1969年Chiharals首次发表关于真菌多糖的抗肿瘤的研究结果后，多种具有免疫调节、抗肿瘤等活性的多糖被陆续发现。多糖是重要的生物效应调节剂(Biological Response Modifier，BRM)，主要通过激活机体的淋巴细胞，提高免疫系统响应能力，间接的发挥抗肿瘤作用。然而越来越多的研究发现，一些真菌多糖可以在体外直接抑制肿瘤细胞增殖，甚至杀死肿瘤细胞。这些多糖通过引起细胞应激，调控肿瘤细胞中信号分子的表达，改变细胞膜特性，诱导细胞凋亡、周期阻滞和自噬。

多糖对肿瘤细胞有广泛的影响，若干多糖通过改变肿瘤细胞膜的生化特性来杀死肿瘤细胞，此作用主要与唾液酸与磷脂转换有关。唾液酸主要位于细胞表面糖蛋白和糖脂的聚糖链末端。唾液酸增多可影响细胞表面电荷特性、抗原决定簇的暴露、膜的物质转运过程、膜表面受体功能等。茯苓多糖作用于S180和K562细胞后，可升高肿瘤细胞膜上的唾液酸含量，干扰细胞膜的肌醇磷脂代谢和磷脂酰肌醇转换，抑制细胞生长。虎奶菇菌核中分离出的水溶性羧甲基β-葡聚糖CMPTR可以降低乳腺癌MCF-7细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，增高促凋亡蛋白Bax的表达，促进细胞凋亡。黄涛涛等研究发现，拟康氏木霉胞外多糖EPS体外处理白血病K562细胞后，诱导K562细胞染色质聚缩，磷脂酰丝氨酸的外翻，线粒体膜电位下降，细胞内活性氧及游离钙离子浓度的提高，表明EPS可能通过线粒体途径诱导K562细胞发生凋亡。真菌多糖的抗肿瘤作用是可靠的、普遍的，开发治疗或辅助治疗肿瘤的天然药物具有坚实的基础。

天然多糖几乎不可合成，而目前临床使用的或正在研究的多数多糖药物都受资源限制，开发成本高昂。真菌多糖优势在于活性高、生产周期短，不受季节、气温等条件限制，且产量高、纯化简单，所以真菌多糖具有较强的市场竞争力和广阔的发展前景。保存在中国普通微生物菌种保藏管理中心菌种保藏号为CGMCC NO.8436的黑根霉(Rhizopus nigricans)是从秸秆中分离获得，属于真菌门接合菌亚门的根霉属，具有极强的生长势。黑根霉是目前发酵工业中常用的微生物菌种，被广泛应用于食品医药行业，如生物转化和有机酸的生产等。通过液体深层发酵技术，可以生产大量的黑根霉菌丝。黑根霉菌丝中含有丰富的多糖，可以从中分离具有潜在抗肿瘤作用的活性多糖，进行临床前研究。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种具有抑制胃癌BGC-823细胞生长活性的黑根霉菌丝多糖及其应用。

术语说明

seveage试剂：一种蛋白质变性剂，可以使蛋白质变性从溶液中析出。

本发明的技术方案如下：

一株具有产抑制胃癌BGC-823细胞生长活性的黑根霉菌丝多糖的黑根霉(Rhizopus nigricans)RN-9，该菌株于2013年11月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所，保藏号CGMCC NO.8436。

上述黑根霉(Rhizopus nigricans)RN-9在制备具有抑制胃癌BGC-823细胞生长活性的黑根霉菌丝多糖中的应用。

上述应用，步骤如下：