[发明专利]一种具有抗癌活性的黑根霉多糖及其应用无效
| 申请号： | 201410275718.1 | 申请日： | 2014-06-19 |
| 公开（公告）号： | CN104017736A | 公开（公告）日： | 2014-09-03 |
| 发明（设计）人： | 陈靠山;陈国创;张鹏英;禹文茜 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12P19/04;C08B37/00;A61K31/715;A61P35/00;C12R1/845 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 250100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 具有 抗癌 活性 黑根霉 多糖 及其 应用 | ||
1.一株具有产抑制胃癌BGC-823细胞生长活性的黑根霉菌丝多糖的黑根霉(Rhizopus nigricans)RN-9，该菌株于2013年11月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所，保藏号CGMCC NO.8436。
2.权利要求1所述黑根霉(Rhizopus nigricans)RN-9在制备具有抑制胃癌BGC-823细胞生长活性的黑根霉菌丝多糖中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤如下：
(1)将菌种保藏号为CGMCC NO.8436的黑根霉(Rhizopus nigricans)RN-9接种于PDA培养基中活化24小时，制得活化菌丝；
(2)将步骤(1)制得的活化菌丝转接于马铃薯蔗糖液体培养基中，培养温度为27～29℃，120rpm，培养10天，4层纱布过滤，制得液体发酵菌丝；
(3)将步骤(2)制得的液体发酵菌丝在75℃下，经95％的乙醇回流脱脂8小时；
(4)将步骤(3)制得的脱脂菌丝通过热水浸提获取热水提取液，60℃减压浓缩至原体积的20％-30％，然后向冷却至室温的浓缩液中加入三倍体积的体积百分比为95％的乙醇溶液，4℃过夜，离心，收集沉淀；
(5)将步骤(4)收集的沉淀用去离子水溶解，然后加入1/3体积的seveage试剂，剧烈振荡脱去蛋白质，制得粗糖溶液；
(6)将步骤(5)制得的粗糖溶液通过弱碱性阴离子交换树脂D-301R脱色后，采用DEAE-Fast Flow阴离子交换凝胶和Sephacryl S-500HR凝胶分离纯化，制得黑根霉菌丝多糖(RPS)溶液；
(7)将步骤(6)制得的黑根霉菌丝多糖溶液经真空冷冻干燥后，制得黑根霉菌丝多糖。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)中活化的时间为20～26h，活化温度为25℃～30℃。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤(3)中的脱脂温度为75℃，时间为8小时。
6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤(4)中的离心条件为：10000rpm离心5min。
7.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤(5)的seveage试剂由氯仿与正丁醇按体积比4：1的比例混合。
8.权利要求1所述黑根霉(Rhizopus nigricans)RN-9在制备具有抑制胃癌BGC-823细胞生长活性的药物中的应用。
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