[发明专利]纤维素酶法提取白花蛇舌草多糖的工艺方法

说明书

技术领域

本发明属于中药活性成分提取生产工艺领域，具体涉及一种用响应面分析优化纤维素酶法提取白花蛇舌草多糖方法及最佳提取工艺条件。

背景技术

多糖又称为多聚糖，是由醛糖或酮糖等单糖通过苷链聚合在一起的一类天然高分子化合物，其分子量一般为数万甚至达数百万，广泛存在于动物细胞膜，植物和微生物细胞壁中，到目前为止，已有300多种多糖类化合物从天然产物中被提取出来，其中从中药材中获得的水溶性多糖最为重要。研究表明：中药多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗辐射、降血糖、降血脂、保肝等多种功能，其中中药多糖的免疫调节活性及抗肿瘤作用倍受关注，是中药多糖研究的中心课题。目前，多糖提取的主要方法有热水浸提法、酸浸提法、碱浸提法、超声波提取法和微波提取法等，这些方法都存在一定的不足，如提取率较低、纯度不高，或者提取温度太高破坏多糖活性，或者会引起多糖分子的降解等。目前，多糖提取工艺多为均匀设计和正交设计，这些设计是采用固定其他因素，改变一个因素的单因素考察法确定工艺条件，不能考察因素之间的相互作用，同时也很难考察多个响应值与因素之间的交互作用关系，因此精确度不高。近年来，国内已开始将生物酶应用于中药活性成分的提取，多糖存在于植物的细胞壁中，纤维素酶可使纤维素、半纤维素等物质降解，裂解植物的细胞壁，从而增大细胞内有效成分向提取介质的扩散而提高多糖得率。响应面分析是一种最优化方法，它是将体系的响应作为一个或多个因素的函数，运用图形技术将这种函数关系显示出来，以供我们凭借直觉的观察来选择试验设计中的最优化条件，可以准确找到整个区域上因素的最佳组合和响应值的最优值，是理想的方法。响应面分析法克服了正交试验设计只能处理离散的水平值，无法找出整个区域上的最佳组合和响应值的最优值的缺陷，用该法研究提取工艺参数，求得的回归方程精确度高。白花蛇舌草是茜草科(Rubiaceae)耳草属植物白花蛇舌草(Herba Hedyotis.)的干燥全草，白花蛇舌草多糖是其重要的活性成分，具有抗菌消炎、抗肿瘤和提高机体免疫功能等作用。为提高白花蛇舌草多糖的提取率，并准确地找出工艺条件的最佳组合，本发明提供了响应面分析优化纤维素酶法提取白花蛇舌草多糖的工艺，以酶解与热水浸提相结合的方法提取白花蛇舌草多糖，工艺简便、省时，提取率高；提取工艺采用响应面分析设计，所得最佳工艺参数可靠、精确，为白花蛇舌草多糖的规模生产和应用提供了一种实用的方法，对于白花蛇舌草的综合开发利用及提高其经济价值具有实际意义。

发明内容

本发明采用纤维素酶法对白花蛇舌草多糖进行提取，并采用响应面设计确定最佳工艺条件，最大限度的去除蛋白质、色素等杂质，制备出含量相对稳定的白花蛇舌草多糖。

本发明所用的方法为采用纤维素酶法从白花蛇舌草提取白花蛇舌草多糖的工艺方法。

本发明采用纤维素酶法提取白花蛇舌草多糖的工艺方法为：将干燥的白花蛇舌草进行粉碎，加入纤维素酶进行浸提，酶灭活、浓缩、醇浓、脱蛋白、脱色素步骤，具体要求为，按照白花蛇舌草与水重量比1：8～12料液比配制进行浸提，在上述料液中加入1.5～2.5％的纤维素酶，用热水浸提两次，灭活酶、80％醇沉三次，三氯乙酸脱蛋白两次，活性炭吸附脱色两次，苯酚-硫酸法测定多糖含量和提取率。工艺分为：添加纤维素酶热水浸提、灭活酶、浓缩、醇沉、脱蛋白、醇沉、脱色素、醇沉等步骤，具体按如下步骤进行：

(1)添加纤维素酶热水浸提：两次浸提，将白花蛇舌草粉碎过40目筛。称取白花蛇舌草粉末，按重量比1：8～12的料液比加入水，混合均匀；用磷酸缓冲液调节pH为7左右，添加1.5～2.5％的纤维素酶，混匀，55℃水浴搅拌浸提60分钟；90℃灭活酶10分钟，抽滤得滤液；将滤渣按重量比1：8～12的料液比加入水，混合均匀，用磷酸缓冲液调节pH为7左右，添加1.5～2.5％的纤维素酶，混匀，55℃水浴搅拌浸提60分钟；90℃灭活酶10分钟，抽滤得滤液；合并两次滤液。

(2)浓缩：将滤液真空旋转减压浓缩至浓度为含生药0.5～1克/毫升左右，放至室温；

(3)第一次醇沉：浓缩液中加入95％乙醇至醇浓度为80％，边加边搅拌，密封盖严，静置24～48小时；抽滤，得白花蛇舌草粗多糖；

(4)脱蛋白：将白花蛇舌草粗多糖加适量水溶解，白花蛇舌草粗多糖与水比例w:v为1:1～1.5kg/L，加等体积5％的三氯乙酸，边加边搅拌，静置60分钟，3000rmp离心5分钟，取上清液；再重复以上操作进行第二次脱蛋白，得脱蛋白多糖溶液；