[发明专利]纤维素酶法提取白花蛇舌草多糖的工艺方法

权利要求书

1.一种纤维素酶法提取白花蛇舌草多糖的工艺方法，其特征在于：按照白花蛇舌草与水重量比1：8～12的料液比配制提取液，在提取液中添加纤维素酶热水浸提，80％醇沉，脱蛋白，脱色素，最后精制而成；

具体按如下步骤进行：

(1)热水浸提：将白花蛇舌草进行粉碎，过40目筛，按1：8～12重量比的料液比加入水配制成白花蛇舌草提取液；用磷酸缓冲液调节pH为7，加入1.5～2.5％的纤维素酶，混匀，55℃水浴搅拌加热提取60分钟，抽滤得滤液；将滤渣按1：8～12重量比的料液比加入水，用磷酸缓冲液调节pH为7，再加入1.5～2.5％的纤维素酶，混匀，55℃水浴搅拌加热提取60分钟再提取一次，抽滤得滤液，合并两次滤液，对滤液进行90℃灭活酶10分钟；

(2)浓缩：将滤液真空旋转减压浓缩至浓度为含生药0.5～1克/毫升，放至室温；

(3)第一次醇沉：在浓缩液中加入95％乙醇至醇浓度为80％，边加边搅拌，密封盖严，静置24～48小时；抽滤，得白花蛇舌草粗多糖；

(4)脱蛋白：将白花蛇舌草粗多糖加适量水溶解，加等体积5％的三氯乙酸，边加边搅拌，静置60分钟，3000rmp离心5分钟，取上清液，再重复以上操作进行第二次脱蛋白，得脱蛋白多糖溶液；

(5)第二次醇沉：在脱蛋白后的白花蛇舌草多糖液中加入95％乙醇至醇浓度为80％，边加边搅拌，密封盖严，静置24～48小时；抽滤，用无水乙醇洗涤2-3次，真空干燥，得白花蛇舌草多糖；

(6)脱色素：将白花蛇舌草多糖用适量水溶解，加入重量1％的活性炭，混匀，加热至80℃温度搅拌30分钟，过滤，收取滤液；将滤液加入重量1％的活性炭，混匀，加热至80℃温度搅拌30分钟，过滤，得脱色素白花蛇舌草多糖溶液；

(7)第三次醇沉：将脱色素白花蛇舌草多糖液加入95％乙醇至醇浓度为80％，边加边搅拌，密封盖严，静置24小时；抽滤，用无水乙醇洗涤2-3次，真空干燥，得精制白花蛇舌草多糖。

2.根据权利要求1所述的纤维素酶法提取白花蛇舌草多糖的工艺方法，其特征在于：(1)取白花蛇舌草进行粉碎，过40目筛，称取白花蛇舌草粉末20克，加水至200毫升，混合均匀；用磷酸缓冲液调节pH为7左右，在料液中添加2％的纤维素酶，混匀，55℃水浴搅拌浸提60分钟；对滤渣进行第二次热水浸提，加水至200毫升，混合均匀，用磷酸缓冲液调节pH为7左右，添加2％的纤维素酶，混匀，55℃水浴搅拌浸提60分钟，抽滤得滤液，合并二次滤液进行90℃灭活酶10分钟；

(2)浓缩：将滤液真空旋转减压浓缩至30～40毫升，放至室温；

(3)第一次醇沉：以上制备的浓缩液中加入95％乙醇至醇浓度为80％，边加边搅拌，密封盖严，静置24小时；抽滤，真空干燥，得白花蛇舌草粗多糖；

(4)第一次脱蛋白：将以上所制得的白花蛇舌草粗多糖加20～30毫升超纯水溶解，加等体积5％的三氯乙酸，边加边搅拌，静置60分钟，3000rmp离心5分钟，取上清液；

(5)第二次脱蛋白：将上清液再加等体积5％的三氯乙酸，边加边搅拌，静置60分钟，3000rmp离心5分钟，取上清液，得脱蛋白多糖溶液；

(6)第二次醇沉：以上脱蛋白多糖溶液中加入95％乙醇至醇浓度为80％，边加边搅拌，密封盖严，静置24小时；进行抽滤，用无水乙醇洗涤2～3次，脱蛋白多糖与无水乙醇w:v为1:3～5kg/L，真空干燥，得脱蛋白多糖；

(7)第一次脱色素：将以上制得的脱蛋白多糖加20～30毫升超纯水溶解，按照1％重量加入活性炭，搅匀，加热至80℃搅拌30分钟，过滤，取滤液；

(8)第二次脱色素：将以上所得滤液再按照1％浓度加入活性炭搅匀，加热至80℃搅拌30分钟，过滤，取滤液；

(9)第三次醇沉：将以上制得的脱色素多糖液加入95％乙醇至醇浓度为80％，边加边搅拌，密封盖严，静置24小时；抽滤，无水乙醇洗涤2-3次，真空干燥，得白花蛇舌草精制多糖1.76～1.79克。