[发明专利]一种检测发酵乳中乳酸菌数的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学领域，更具体的说是涉及一种检测发酵乳中乳酸菌数的方法。

背景技术

发酵乳在GB19302-2010中的定义为“以生牛(羊)乳或乳粉为原料，经杀菌、发酵后制成的pH值降低的产品”，涵盖了发酵乳、酸乳、风味发酵乳、风味酸乳等产品。由于食用时发酵乳及发酵乳饮料中的活菌数需达到一定数量才能起到保健作用，因此GB19302-2010中明确规定了发酵乳产品的乳酸菌限量：乳酸菌数≥1×10⁶cfu/g(ml)。

乳酸菌总数为发酵乳产品出厂检测的关键检测项目，目前行业内对发酵乳乳酸菌总数的检测手段为GB4789.35方法，该方法不但需要专业人员操作，运行成本较高，而最为重要的是该方法的检验周期为48小时，由于发酵乳为全冷链运输，且其销售保质期很短(15天)，漫长的出厂检验严重缩短了发酵乳产品原本就很短的货架期，严重了影响企业的利润。

为了缩短检测时间，现有技术报道基于刃天青还原法，采用医疗卫生领域的RGB颜色信息采集仪器，记录检测样品颜色变化，而检测样品颜色变化和细菌总数相关，从而获得细菌总数。但是，由于发酵乳产品的pH过低(市售的合格发酵乳pH值在4.0～4.5范围)，不符合刃天青染料还原法的反应条件。相关研究结果证明，应用刃天青染料还原法检测乳酸菌总数，pH值在6.5～7.0范围内检测结果无显著差异。因此需要将发酵乳样品经处理后使其pH值在6.5～7.0范围内，方可应用刃天青染料还原法对其乳酸菌总数进行检测。

常规的pH值调节方法为对样品添加pH值较高的缓冲液调节至所需pH值范围，这一方法虽然用量较少，但由于发酵乳产品的pH值并不是固定值，因此应用缓冲液调节至同一pH值会使样品的稀释程度不同，从而导致检测结果不准确。

如果加入中性纯水或去离子水稀释，可以使样品pH值达到6.5-7.0范围内，但需要对发酵乳样品进行100倍以上的稀释，因而大大的降低了检测精度，更为重要的是，根据RGB颜色信息采集的原理，其为通过LED灯光对样品的反射来采集颜色变化信息，如果将样品稀释近100倍，样品稀释液已经几乎完全透明，因样品对光的反射大大降低，无法准确采集颜色变化信息，无法进行准确的检测。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种检测发酵乳中乳酸菌数的方法，使得所述方法能够快速、准确的检测出发酵乳中的乳酸菌数。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种检测发酵乳中乳酸菌数的方法，包括如下步骤：

步骤1、将发酵乳标准品用UHT乳稀释5-20倍，然后向稀释后的发酵乳标准品中加入刃天青反应，用RGB颜色信息采集仪器记录发酵乳标准品终点R值与起始R值的R差值，并建立R差值X与乳酸菌菌落总数Y之间的标准方程；

其中，所述终点R值为第1-15分钟内任意时间点的R值，所述起点R值为0分钟的R值；

步骤2、将步骤1中发酵乳标准品替换为发酵乳待测样品，在相同的检测环境下，记录发酵乳待测样品的R差值并代入步骤1中获得的标准方程中，检测出发酵乳待测样品中的乳酸菌数。

乳酸菌在代谢过程中，由于生理需要产生氧化还原酶，该酶和与刃天青反应使其由蓝色变为粉色，而氧化还原酶的多少和乳酸菌数多少直接相关，进而通过仪器记录反应的颜色变化(R值变化)，建立起和乳酸菌数相关的公式。

本发明所述UHT(Ultra High Temperature treated)乳为超高温灭菌乳。超高温瞬时灭菌，135-140℃，4-10秒，是鲜奶处理的一种灭菌工艺。本发明采用UHT乳对样品进行稀释，第一，其不会带入细菌影响检测结果；第二，其不会改变溶液的透明度，处理的样品依然为不透明的乳白色液体；第三，UHT乳为负电性胶体溶液，负电性胶粒将吸附氢离子，因此在稀释用量相同的前提下，UHT乳稀释的样品pH值更高，因此使用UHT乳调节样品pH值至6.5-7.0用量较纯水更少。

本发明分别采用UHT乳稀释发酵乳8倍、10倍和15倍，稀释后的发酵乳pH值均处于6.5-6.9范围内。

在本发明技术方案中，优选地，所述发酵乳标准品个数为5个以上。

优选地，所述刃天青浓度为0.0005-0.05g/mL。

优选地，所述稀释后的发酵乳标准品和刃天青的体积比为9:1。

优选地，所述稀释倍数为8-15倍，更优选地，所述稀释倍数为10倍。

优选地，所述终点R值为第5分钟的R值。