[发明专利]钯-金合金纳米笼免疫层析试纸条检测微囊藻毒素-LR的方法

说明书

技术领域

本发明属免疫分析化学技术领域。

背景技术

富营养化严重的淡水湖泊，每年夏天气温上升均要引起蓝藻爆发，造成严重污染。在蓝藻大家族中，有一些种类会分泌较强的毒素[见史红星,曲久辉,王爱民等,官厅水库蓝绿藻及藻毒素初步研究，高等学校化学学报,2005,26(9):1650-1652]，而微囊藻毒素(microcystins，MCs)是其中的典型代表。其中2，4位上含亮氨酸和精氨酸的MCs-LR是已知的最易出现和毒性最强的环状七肽肝毒素，是淡水藻类植物中的促癌因子[见Yu S.Z.,Chen G.,Zhi X.L.,et al.Primary liver cancer:natural toxins and prevention in China(J).Toxicol Sci,1998,23(Suppl2):143-148；以及见俞顺章，赵宁,资晓林等，饮水中微囊藻毒素与我国原发性肝癌关系的研究，(J).中华肿瘤杂志,2001,23(2):96-99]，具有肾毒性、免疫毒性和明显的肝毒性，动物饮用藻类毒素污染的水可发生中毒甚至死亡[见Carmichael W.W.,Jones C.L.A.,Mahmood N.A.,et al.Algal toxins and water based disease(J).CRC Crit,Rev.Environ.Control1985；15:275-313]。同时，微囊藻毒素是蛋白磷酸酶的抑制剂，它能够激活人体内的癌基因，同时抑制抗癌基因，使抗癌基因失活，使癌症发生的可能性提高近10倍。有研究表明，长期通过喝水接触此类毒素可能会诱发原发性肝癌,提高肿瘤的活性引发死亡[见陈刚,俞顺章,卫国荣等.肝癌高发区饮用水型中微囊藻毒素含量调查(J)中华预防医学杂志，1996；30(1):6-9；以及见Gupta N.,Pant S.C.,Vijayaraghavan R.,et al,Comparative toxicity evaluation of cyanobacterial cyclic peptide toxin microcystin variants(LR,RR,YR)in mice(J),Toxicology,2003,188(2-3):285–296.以及Puerto M,Pichardo S,Jos A,et al,Comparison of the toxicity induced by microcystin-RR and microcystin-YR in differentiated and undifferentiated Caco-2cells(J),Toxicon,2009,54(2):161-169.]。而自来水厂的氯消毒过程不仅不能除去藻类毒素，反而有可能增加其致突活性[见崔莹,徐祖信,尹海龙.水中藻类污染物及其藻毒素分析方法研究进展(J).安徽农业科学.2008，36(29)：12873-12875,12878]。WHO和我国限定饮用水中微囊藻毒素MC-LR含量不得大于1.0μg/mL(GB5749-2006)。因此，建立灵敏、特异的水中微囊藻毒素检测方法具有重要的意义。

微囊藻毒素-LR(Microcystin-LR)，分子式为C₄₉H₇₄N₁₀O₁₂，分子量为995D(道尔顿)，其结构式见图1。

微囊藻毒素的检测方法可分为生物测试法、化学分析法、生化分析法等。；化学检测包括毛细管电泳(CE)、核磁共振(NMR)、色质谱联用(LC-MS)等,其中使用最为广泛和成熟的方法是高效液相色谱(HPLC)。生化分析法包括酶联免疫吸附法和蛋白磷酸酶抑制法，如Camp`as等采用竞争酶联免疫法和丝网印刷电极实现了对微囊藻毒素的安培检测。鞠熀先等将抗体共价结合到富含羧基的碳纳米角上构建了灵敏的竞争型微囊藻毒素电化学免疫传感器。以上方法不仅依赖大型仪器设备，而且需要具有专门操作技术人员,不能用于现场分析,限制了这些方法的普及应用。

近几年随着生化免疫技术以及酶联免疫技术的进一步发展，快速、简便、易操作的免疫层析技术法开始被广泛地应用到水体中微囊藻素的检测中。但所用标记物金溶胶存在容易团聚，不易保存等缺点。