[发明专利]Trp-Trp-Trp五肽修饰的β-咔啉，其制备，纳米结构，活性和应用

说明书

技术领域

本发明涉及1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Lys-Glu及其制备方法，涉及它的纳米结构，涉及它的体内外抗肿瘤作用，涉及它抗肿瘤细胞粘附侵袭和迁移的作用。因而本发明涉及它在制备抗肿瘤药物，制备抗肿瘤细胞粘附侵袭和迁移药物中的应用。

技术背景

恶性肿瘤严重威胁人类的健康。除了自身对肿瘤患者的预后恶劣之外，恶性肿瘤并发的炎症、血栓和转移进一步恶化患者的预后。例如，超过90％以上的恶性肿瘤患者都是死于肿瘤转移。肿瘤转移依赖于4个因素：1)肿瘤细胞表面形成微血栓，逃避巨噬细胞吞噬，通过血液循环迁移到远端；2)迁移到远端的肿瘤细胞粘附到血管壁；3)细胞粘附到血管壁的肿瘤细胞通过侵袭出血管而进入正常组织；4)炎症使进入正常组织的肿瘤细胞成长为转移的新生肿瘤。

由于现有抗肿瘤药物不具备抗炎症、抗血栓和抗转移作用，所以疗效不理想。发明同时具有抗肿瘤、抗炎症、抗血栓和抗肿瘤转移作用的药物是临床的迫切需求。

RGD四肽，即RGDS，RGDF和RGDV是整合素α_Vβ₃的阻断剂，具有抗血栓和抗细胞粘附活性。发明人发现Trp-Trp-Trp-Lys-Glu五肽(WWWKE五肽)具有抗粘附活性。申请人曾经把RGD四肽与雌激素偶联，制备没有凝血副作用的抗骨质疏松剂。申请人曾经把RGD四肽与四氢-β-咔啉-3-羧酸偶联制备高效的抗血栓剂。申请人也曾经用氨基酸修饰四氢-β-咔啉-3-羧酸、β-咔啉-3-羧酸及1-位取代的β-咔啉-3-羧酸，包括1-位取代的四氢-β-咔啉-3-羧酸或1-位取代的β-咔啉-3-羧酸制备高效的抗血栓剂或抗肿瘤剂。下面是发明人创造的结构类型的代表。尽管发明人付出了大量研究精力，筛选了数百种化合物，一直没有得到同时具有抗肿瘤和抗肿瘤转移作用的化合物。

发明人在分析数百种化合物的结构及活性变化的基础上，认识到将WWWKE五肽与1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸偶联，形成的化合物会同时具有抗肿瘤和抗肿瘤转移作用。基于这个认识，发明人提出了本发明。

发明内容

本发明的第一个内容是提供下面结构的1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Lys-Glu。

本发明的第二个内容是提供1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Lys-Glu的制备方法，该方法包括：

(1)在二氯亚砜(SOCl2)的存在下，L-色氨酸和甲醇反应，生成L-色氨酸甲酯；

(2)在三氟醋酸存在下，在水中4-异丙基苯甲醛(枯茗醛)和L-色氨酸甲酯缩合为(3S)-1-(4-异丙基苯基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯；

(3)在二氧化硒(SeO₂)的存在下，(3S)-1-(4-异丙基苯基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯在二氧六环中氧化1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯；

(4)冰浴下在氢氧化钠的水溶液(2M)和甲醇中，1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯转化为1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸；

(5)采用逐步缩合法，在N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下，在干燥四氢呋喃(THF)中反应，得到全保护多肽序列Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl；

(6)冰浴下在氯化氢的乙酸乙酯溶液中(4M)，全保护多肽序列Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl脱除Boc得Trp-Trp-Trp-OBzl；

(7)在N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下，1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸在无水四氢呋喃(THF)中与Trp-Trp-Trp-OBzl缩合为1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-OBzl；

(8)冰浴下在氢氧化钠的水溶液(2M)和甲醇中，化合物1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-OBzl转化为1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp；

(9)采用逐步缩合法，在N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下，在干燥四氢呋喃中反应，得到全保护多肽序列Boc-Lys(Fmoc)-Glu(OBzl)-OBzl；