[发明专利]一种头孢霉素C的制备方法及其所用的基因工程菌

说明书

本发明公开了一种头孢霉素C的制备方法及其所用的基因工程菌，还公开了该基因工程菌的制备方法。所述孢霉素C的制备方法包括以下步骤：(1)将携带如序列表中SEQ ID NO：1所示的核酸的重组表达载体转染顶头孢霉菌(Acremonium chrysogenum)，获得重组表达转化体；(2)发酵培养所得重组表达转化体，从培养物中分离头孢霉素C即得。本发明通过在顶头孢霉CPC高产菌株额外引入AcveA基因，有效提高了CPC合成基因的转录水平，从而通过导入CPC合成调控基因AcveA提高了CPC的产量。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种头孢霉素C的制备方法及其所用的基因工程菌。

背景技术

头孢菌素C(CPC)是生产头孢菌素类抗生素重要中间体7-氨基头孢烷酸(7-ACA)的主要原料。顶头孢霉是发酵产CPC的一类重要工业微生物。经过多年研究，CPC在顶头孢霉体内的生物合成途径已被阐述得较为清楚，其中涉及的所有合成基因都已克隆得到，且纯化获得了这些基因编码的大部分酶(请参见文献Martin JF.Alpha-aminoadipyl-cysteinyl-valine synthetases in beta-lactam producing organisms.From Abraham'sdiscoveries to novel concepts of non-ribosomal peptide synthesis[J].JAntibiot(Tokyo),2000,53(10):1008-1021)。研究发现，CPC生物合成途径中的基因为成簇排列，主要分为两部分，一是位于7号染色体上的早期基因簇：包括合成基因pcbAB、pcbC、cefD1以及cefD2；二是位于1号染色体上的晚期基因簇，由同一个双向启动子启动的合成基因cefEF和cefG组成(请参见文献Gutierrez S,Fierro F,Casqueiro J,et al.Geneorganization and plasticity of the beta-lactam genes in different filamentousfungi[J].Antonie Van Leeuwenhoek,1999,75(1-2):81-94.)。这些基因直接影响了顶头孢霉最终发酵产物中CPC的含量。