[发明专利]一种头孢霉素C的制备方法及其所用的基因工程菌

权利要求书

1.一种头孢霉素C的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将携带如序列表中SEQ ID NO：1所示的核酸的重组表达载体转染顶头孢霉菌(Acremonium chrysogenum)，获得重组表达转化体；

(2)发酵培养步骤(1)所得重组表达转化体，从培养物中分离头孢霉素C即得。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述顶头孢霉菌为顶头孢霉菌CPCC480085。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述重组表达载体为携带如序列表中SEQ ID NO：1所示的核酸的pYG858质粒。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述发酵培养包括以下步骤：将该重组表达转化体接种于种子培养基中，温度25～30℃，种子培养3～5天；将所得培养物转接至发酵培养基中，20～25℃，发酵培养5～10天。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述种子培养基为：玉米浆6％，蔗糖3.5％，葡萄糖0.5％，硫酸铵0.8％，甲硫氨酸0.05％，CaCO₃0.5％，豆油1％，种子培养基的pH为6.5，所述百分比为质量百分比。

6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基为：玉米浆10％，淀粉3％，糊精6％，葡萄糖0.5％，甲硫氨酸0.6％,尿素0.3％，KH₂PO₄0.9％，七水硫酸镁0.3％，硫酸铵1.3％，CaCO₃1％，微量元素溶液0.2％，豆油2％，所述微量元素溶液为：FeSO₄·7H₂O0.8％，MnSO₄·H₂O0.2％，ZnSO₄·7H₂O0.2％，CuSO₄·5H₂O0.2％，pH为1.0，所述百分比为质量百分比。

7.一种基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是包含携带如序列表中SEQ ID NO：1所示的核酸的重组表达载体的顶头孢霉菌。

8.一种如权利要求7所述基因工程菌的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：利用携带如序列表中SEQ ID NO：1所示的核酸的重组表达载体转化顶头孢霉菌株。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述转化的方法为PEG-CaCl₂介导的原生质体转化法，该原生质体转化法包括以下步骤：培养收集顶头孢霉原生质体，原生质体浓度大于10⁸个/ml，加入含10～30％PEG6000的P缓冲液，所述P缓冲液为：KCl4.47％，CaCl₂0.278％和MgCl₂0.203％，20℃～25℃放置10～30分钟，离心去上清，沉淀用适当体积的P缓冲液溶解后分别加入60℃～70℃预热的7％软琼脂中，立即倒入再生平板，所述再生平板为：胰蛋白胨3.0％，大豆蛋白胨0.8％，NaCl0.8％，蔗糖20.6％，pH7.0，将再生平板放入25℃～30℃培养箱中倒置培养，48～72小时后上层加入博莱霉素，博来霉素的浓度为1.5μg/μl～3.5μg/μl，26℃～30℃倒置培养5～8天后挑取博来霉素抗性转化子斜面培养7～10天即得，所述百分比均为质量百分比。

10.如权利要求7所述基因工程菌在制备头孢霉素C中的用途。