[发明专利]一种清真肉类食品的分子鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，尤其涉及一种清真肉类食品的分子鉴定方法。 

背景技术

现有检测技术的步骤较多，操作程序较为繁琐，对食品中含有微量猪肉检测的力度没有保证。 

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种清真肉类食品的分子鉴定方法，旨在解决现有检测技术的步骤较多，操作程序较为繁琐，对食品中含有微量猪肉检测的力度没有保证的问题。 

本发明实施例是这样实现的，一种清真肉类食品的分子鉴定方法，该清真肉类食品的分子鉴定方法包括以下步骤： 

第一步，取将待检测样品25mg，使用通用型柱式基因组提取试剂盒提取基因组DNA，操作步骤中Proteinase K消化时，采取过夜处理，消化时间10个小时以上； 

第二步，使用设计的引物16SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR，对提取的DNA进行PCR扩增，PCR反应程序94度4min，94度30s，53度30s，72度1.5min，72度10分钟； 

第三步，然后将扩增产物，交生物测序公司使用3730测序仪测序； 

第四步，将测序产物与给出的序列联合，使用Clustalx软件进行比对，并构建NJ树，鉴定是否有猪肉狗肉和驴肉的非清真成分存在。 

进一步，在第二步中，16SA-SB-ZNYF引物的5’-3’基因序列为： 

CGGCCGCGGTATTCTGACCGTGC。 

进一步，在第二步中，16SA-SB-ZNYR引物的5’-3’基因序列为： 

GATCACGTAGGACTTTAATCGTTG。 

进一步，在第三步中，如果出现测序结果峰型较乱的情况，使用额外三对引物(16SA-猪&16SA-SB-ZNYR，16SA-狗&16SA-SB-ZNYR，16SA-驴&16SA-SB-ZNYR，分别扩增交生物测序公司使用3730测序仪测序； 

如果依然测序结果混乱，改用将PCR产物连接至克隆载体，转化后提取质粒，挑选克隆不少于6个进行测序。 

进一步，在第三步中，16SA-猪引物的5’-3’基因序列为： 

TTAACTATTCCAAAAGTTAAAC； 

16SA-狗引物的5’-3’基因序列为： 

TTAACTAACCCAAACTTATGGAT； 

16SA-驴引物的5’-3’基因序列为： 

TTAACTGATTCACAAAAAACAACATAC。 

本发明提供的清真肉类食品的分子鉴定方法，通过取将待检测样品25mg，提取基因组DNA；使用设计的引物16SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR，对提取的DNA进行PCR扩增；然后将扩增产物，交生物测序公司使用3730测序仪测序；使用Clustalx软件进行比对，并构建NJ树，鉴定是否有猪肉狗肉和驴肉的非清真成分存在。本发明针对猪肉新设计了专用扩增引物，可以高效率扩增猪肉DNA，即使食品中含有微量猪肉、狗肉或驴肉DNA也可以被识别；扩增产物直接测序或者克隆测序，得到的测序结果对猪、狗、驴、牛、羊等的分辨率高，可以准确区分出猪肉、狗肉或驴肉成分；准确检测肉类制品中是否含有猪肉、狗肉或驴肉。 

附图说明

图1是本发明实施例提供的清真肉类食品的分子鉴定方法流程图。 

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。 

下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。 

如图1所示，本发明实施例的清真肉类食品的分子鉴定方法包括以下步骤： 

S101：取将待检测样品25mg，使用通用型柱式基因组提取试剂盒提取基因组DNA，操作步骤中Proteinase K消化时，采取过夜处理，消化时间10个小时以上； 

S102：使用设计的引物，16SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR，对提取的DNA进行PCR扩增，PCR反应程序94度4min，94度30s，53度30s，72度1.5min，72度10分钟； 

S103：将扩增产物，交生物测序公司使用3730测序仪测序；