[发明专利]一种清真肉类食品的分子鉴定方法

权利要求书

1.一种清真肉类食品的分子鉴定方法，其特征在于，该清真肉类食品的分子鉴定方法包括以下步骤：

第一步，取将待检测样品25mg，使用通用型柱式基因组提取试剂盒提取基因组DNA，操作步骤中Proteinase K消化时，采取过夜处理，消化时间10个小时以上；

第二步，使用设计的引物16SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR，对提取的DNA进行PCR扩增，PCR反应程序94度4min，94度30s，53度30s，72度1.5min，72度10分钟；

第三步，然后将扩增产物，交生物测序公司使用3730测序仪测序；

第四步，将测序产物与给出的序列联合，使用Clustalx软件进行比对，并构建NJ树，鉴定是否有猪肉狗肉和驴肉的非清真成分存在。

2.如权利要求1所述的清真肉类食品的分子鉴定方法，其特征在于，在第二步中，16SA-SB-ZNYF引物的5’-3’基因序列为：

CGGCCGCGGTATTCTGACCGTGC。

3.如权利要求1所述的清真肉类食品的分子鉴定方法，其特征在于，在第二步中，16SA-SB-ZNYR引物的5’-3’基因序列为：

GATCACGTAGGACTTTAATCGTTG。

4.如权利要求1所述的清真肉类食品的分子鉴定方法，其特征在于，在第三步中，如果出现测序结果峰型较乱的情况，使用额外三对引物(16SA-猪&16SA-SB-ZNYR，16SA-狗&16SA-SB-ZNYR，16SA-驴&16SA-SB-ZNYR，分别扩增交生物测序公司使用3730测序仪测序；

如果依然测序结果混乱，改用将PCR产物连接至克隆载体，转化后提取质粒，挑选克隆不少于6个进行测序。

5.如权利要求4所述的清真肉类食品的分子鉴定方法，其特征在于，在第三步中，16SA-猪引物的5’-3’基因序列为：

TTAACTATTCCAAAAGTTAAAC；

16SA-狗引物的5’-3’基因序列为：

TTAACTAACCCAAACTTATGGAT；

16SA-驴引物的5’-3’基因序列为：

TTAACTGATTCACAAAAAACAACATAC。