[发明专利]动物血、脑样品中痕量烟碱及其主要代谢物的同步分析方法

权利要求书

1.一种动物血、脑样品中痕量烟碱及其主要代谢物的同步分析方法，其特征在于：利用微透析系统同步收集动物血透析液及脑组织透析液样品于不同的色谱进样瓶内衬管中，分别加入NIC-d₃、COT-d₃混合内标溶液，混匀后，直接采用UPLC- MS/MS分析检测微透析样品中烟碱和可替宁的含量。

2.根据权利要求1所述的动物血、脑内痕量烟碱及其主要代谢物的同步分析方法，其特征在于：该方法具体包括以下步骤：

a．同步且分别收集动物摄入烟碱后的血液微透析样品和脑微透析样品；

b. 混合内标工作溶液配制：以稳定同位素NIC-d3、COT-d3作为内标物，配制浓度均为40ng/mL的混合内标工作溶液；

 c. 混合标准溶液配制：分别准确称取烟碱、可替宁标准品，配制浓度梯度的系列混合标准溶液，并各加入25.0mL浓度为40ng/mL的混合内标工作溶液，使内标物的浓度均为10ng/mL，混合标准溶液的浓度为0.025、0.10、0.50、1.00、2.50、5.00、10.0和25.0ng/mL；

d. 标准曲线绘制：将烟碱、可替宁系列混合标准溶液按由低到高的浓度顺序进行UPLC-MS/MS分析，以各目标分析物的色谱峰面积与内标峰面积之比（Y）对其相应的浓度（X）进行线性回归，得到标准曲线回归方程及相关系数；

e．样品检测及数据处理：将步骤a收集的微透析样品30μL置于色谱进样瓶内衬管中，加入10μL浓度为40ng/mL的混合内标工作溶液，混匀后直接进行UPLC- MS/MS分析，利用标准曲线法计算透析液样品中各目标物的含量，揭示烟碱在大鼠体内的代谢规律。

3.根据权利要求1所述的动物血、脑内痕量烟碱及其主要代谢物的同步分析方法，其特征在于：在UPLC-MS/MS分析中，其色谱条件、质谱条件具体如下：

色谱条件：

色谱柱：Waters Atlantis HILIC Silica ,规格2.1 ×150 mm, i.d.，1.7 μm,

柱温：30 ℃；流动相：A：10 mmol/L 乙酸铵水溶液，B：乙腈（含0.1%甲酸，体积分数）；流速：0.5 mL/min；梯度洗脱；进样量：10 μL；柱平衡时间为1 min；

质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描模式：正离子扫描（扫描范围为 m/z 50 ~ 500）；监测方式：多反应监测（MRM）；毛细管电压：3.2 kV，离子源和气化温度分别为100 ℃和350 ℃ ；脱溶剂气（N₂）和气帘气（N₂）流速分别为600 L/h和50 L/h。

4.根据权利要求1所述的动物血、脑内痕量烟碱及其主要代谢物的同步分析方法，其特征在于：梯度洗脱条件见表1：

 

表1 梯度洗脱条件

时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0595530705.15956595

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