[发明专利]假交替单胞菌胞外多糖在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种假交替单胞菌胞外多糖在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用，属于功能糖技术领域。

背景技术

近年来，环境污染问题日益突出，人们的免疫力逐渐低下，恶性肿瘤的发病越来越频繁，并且其发病率也逐渐增高。恶性肿瘤已经成为了威胁人类身体健康的头号杀手，是危害生命的严重疾病。目前，可通过外科手术、放疗及化疗等方法治疗肿瘤，但是手术无法去除已经转移的肿瘤，放疗和化疗对于人体有严重的副作用，有些抗肿瘤药物服用之后，可能影响肝功能，有些会影响消化系统，出现恶心、呕吐等症状，有的会引起神经毒性。因此，研究出一种对对机体的毒副作用小，同时又能达到抑制和杀死恶性肿瘤细胞的目的药物成为抗肿瘤药物研究的新的焦点。

乳腺癌是发生在乳腺上皮组织的恶性肿瘤。虽然乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌不会导致生命危险，但是由于乳腺癌细胞已经失去了正常细胞的特性，细胞和细胞之间的连接松散，细胞容易脱落。乳腺癌细胞脱落之后，游离的癌细胞会随着血液和淋巴液扩散至全身，危及生命。近年来我国乳腺癌发病率呈增长趋势，目前乳腺癌已经成为了威胁女性身心健康的一种常见肿瘤。目前乳腺癌的治疗方法主要为外科手术、放疗、化疗等方法,这些方法对于人体都有一定的伤害。

多糖(polysaccharide)是由20个以上的单糖通过糖苷键链接形成的含醛基或酮基的多羟基聚合物及其衍生物，广泛分布于动物、植物、及微生物的细胞壁中。多糖具有广泛的生物学功能，不仅是生物体内能量的直接来源，还参与细胞间的识别，细胞间物质运输，免疫功能的调节，肿瘤细胞的凋亡过程。大量的研究结果表明，多糖不仅具有复杂多方面的免疫调节功能，而且多糖能够抗菌、抗病毒、抗辐射、抗肿瘤。多糖作为一种免疫调节剂，激活机体的免疫受体，能够提高机体的免疫功能。而在癌症治疗中，多糖类药物对机体的毒副作用小，安全性较高，同时抑瘤效果也较好。所以多糖抗肿瘤作用的研究已成为科学研究的热点问题。研究表明，多糖抗肿瘤作用主要是对肿瘤细胞的直接作用或者是提高机体的免疫机能。多糖对肿瘤细胞的直接作用主要表现为直接抑制肿瘤细胞的生长，改变肿瘤细胞膜的生长特性，影响肿瘤细胞内的信号途径，对癌基因及抑癌基因的作用等。多糖提高机体的免疫机能主要是通过影响免疫器官，活化巨噬细胞，促进细胞因子的分泌等等。

南极常年干燥、酷寒、烈风，由于南极地理环境及自然气候的特别性，给予了南极微生物独特的生理生化特性。南极海冰中存在着大量的微生物，这些微生物可产生大量的胞外多糖，这些胞外多糖具有良好的生物活性。前期的研究发现假交替单胞菌Pseudoaltermonas sp.S-5胞外多糖能够在体外促进淋巴细胞的增殖。PEP能激活巨噬细胞，改变其形态，提高免疫活性。本发明在此基础上，探究该胞外多糖对于乳腺癌细胞的作用，寻找对机体副作用小，同时抑制和杀伤肿瘤细胞的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对机体毒副作用小，且能抑制和杀死肿瘤细胞的假交替单胞菌胞外多糖在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用。

本发明技术方案如下：

一种假交替单胞菌(Pseudoaltermonas sp.)S-5胞外多糖在制备抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖药物中的应用；所述的胞外多糖按如下步骤制备：

(1)将菌种保藏号为CGMCC NO.3433的假交替单胞菌(Pseudoaltermonas sp.)S-5经活化、扩大培养后，制得扩繁菌种；

(2)将步骤(1)制得的扩繁菌种接种于发酵培养基中，向发酵培养基中加入发酵培养基重量0.3％的灭菌豆油后，7-9℃有氧搅拌培养50～60h，搅拌速度160～170r/min，得液体发酵液；

(3)将步骤(2)制得的液体发酵液离心，收集上清液；

(4)将步骤(3)制得的上清液在50～60℃条件下，旋转蒸发浓缩至原体积的1/4，得浓缩液，然后向浓缩液中加入体积百分比为95％的乙醇，经醇沉后，离心，收集沉淀；

(5)将步骤(4)收集的沉淀用水溶解，加入1/3体积的seveage试剂脱去蛋白质，制得粗糖溶液；

(6)将步骤(5)制得的粗糖溶液通过大孔树脂D-301R脱色后，再经过DEAE-Fast Flow阴离子交换柱和Sephadex G-75层析柱分离，制得纯化的胞外多糖溶液；

(7)将步骤(6)制得的胞外多糖溶液经真空冷冻干燥后，制得适冷微生物胞外多糖纯品；