[发明专利]一种检测巴贝西虫的方法及其专用试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测巴贝西虫的方法及其专用试剂盒。本发明公开的一组DNA分子，由如下(1)‑(3)所示的DNA分子组成：(1)SEQ ID No.2所示的DNA分子；(2)SEQ ID No.3所示的DNA分子；(3)SEQ ID No.4所示的DNA分子。本发明公开的方法较之当前临床上采用的形态学、免疫荧光法，可大大提高检测巴贝西虫的灵敏度，具有快速、简便的特点，适合基层医院以及巴贝西虫病的传播媒介、动物宿主监测使用。

技术领域

本发明涉及一种检测巴贝西虫的方法及其专用试剂盒，属于生物技术领域。

背景技术

巴贝西虫病(Babesiosis)临床主要症状为高热、溶血性贫血、黄疸和血红蛋白尿，是一种可经媒介蜱叮咬、接触动物(血液)、输血以及母婴传播等独特方式传播的新发人兽共患病。近几年来，在世界各地人群感染病例不断发生，甚至在美国几个州爆发疫情，在我国山东、浙江、新疆、云南及北京等地不断发生巴贝西虫确诊/疑似病例，已成为一种“新的健康威胁”。目前全世界已相继报道了寄生于脊椎动物体内的巴贝西虫超过100种。感染人的巴贝西虫主要包括微小巴贝西虫、邓氏巴贝西虫、分歧巴贝西虫和猎户巴贝西虫、巴贝西虫KO1株等。由于该病存在相当比例的隐性或亚临床感染者，临床上极易误诊漏诊。临床上目前主要利用血涂片、血清学检查、补体结合试验(CFT)甚至动物接种试验来进行确诊。但由于形态学敏感性较低，血清学检测不适合早期诊断，动物接种后需经一定的潜伏期即可在末梢血涂片中查到虫体。受到很大限制。荧光PCR方法由于其操作步骤简单，反应时间更短，整个过程可在2h内完成，结果判定简单客观，灵敏特异且能应用在自动化分析系统中，故而适宜门诊就诊患者初查。Taqman探针带有一个荧光发光基团和一个荧光淬灭基团，完整的探针在特定光源激发下，发光基团所产生的荧光被淬灭基团全部吸收，样品无荧光。PCR过程中，Taq酶在延伸DNA链的同时，可通过自身的5’→3’核酸外切酶活性降解与模板结合的特异性荧光探针，使荧光报告基团与淬灭基团分离，分离后的荧光报告基团在特定光源激发下产生荧光。通过监测整个PCR过程荧光信号的变化，对未知模板进行定性分析。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测巴贝西虫的方法及其专用试剂盒，用本发明提供的方法检测巴贝西虫具有准确可靠、敏感性和特异性好的特点。

本发明提供一组DNA分子，由如下(1)-(3)所示的DNA分子组成：

(1)SEQ ID No.2所示的DNA分子；

(2)SEQ ID No.3所示的DNA分子；

(3)SEQ ID No.4所示的DNA分子。

一种检测样品中巴贝西虫含量的试剂盒也属于本发明的保护范围，该试剂盒包含如下(1)-(4)所示的分子：

(1)SEQ ID No.2所示的DNA分子；

(2)SEQ ID No.3所示的DNA分子；

(3)SEQ ID No.4所示的DNA分子，或5’端连接报告荧光基团，3’端连接淬灭荧光基团的SEQ ID No.4所示的DNA分子；

(4)SEQ ID No.5所示的DNA分子；

该试剂盒还包含使用说明书，说明书记载内容如下：以不同浓度的含有SEQ IDNo.5所示DNA片段的重组质粒为模板，以SEQ ID No.2所示的DNA分子和SEQ ID No.3所示的DNA分子为引物，以5’端连接报告荧光基团，3’端连接淬灭荧光基团的SEQ ID No.4所示的DNA分子为探针，进行实时荧光定量PCR扩增，以每个反应中重组质粒的拷贝数为横坐标，对应的Ct值为纵坐标，制作标准曲线，得到标准曲线公式；提取待检样品的DNA，以其为模板，按照上述方法，得到对应的Ct值，记作A；将A带入标准曲线公式，得到重组质粒的拷贝数，即为待检样品中的巴贝西虫含量；