[发明专利]通过高效液相色谱法分离测定雷美替胺及其杂质的方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及通过高效液相色谱法分离测定雷美替胺及其杂质的方法。

背景技术

雷美替胺(Ramelteon)是日本武田公司(TAKEDA)开发的用于治疗难以入睡型失眠症和慢性失眠和短期失眠的新分子药物，是目前唯一上市的用于治疗难入睡型失眠症褪黑素受体激动剂，对慢性失眠和短期失眠也有确切疗效。由于本品无依赖性和药物滥用倾向，FDA将其列为不受管制的催眠药物。雷美替胺于2005年在美国上市，商品名：ROZEREM，2008年在日本上市，商品名：ロゼレム

雷美替胺的化学名为(S)-N-[2-(1，6，7，8-四氢-2H-茚并-[5，4-b]呋喃-8-基)乙基]丙酰胺，分子式：C₁₆H₂₁NO₂，结构式如下：

雷美替胺的常见不良反应为头痛、疲劳、嗜睡，可能由其中的杂质引起。雷美替胺合成过程中的起始原料、中间体、终产物类似物及降解产物等均可能成为杂质，从而影响产品的质量。因此，对原料药及制剂进行质量控制是药物研发工作中的重点和难点。

雷美替胺相关的杂质包括：LM-1、S-IBU(S-布洛芬)、杂质1、杂质2、杂质3、杂质4、杂质5、杂质6、雷美替胺对映异构体，其结构式和化学式等信息如下表所示：

杂质1、杂质2、杂质3、杂质4、杂质5、杂质6、对映异构体为雷美替胺合成过程中较易引入的杂质，LM-1、S-IBU为合成雷美替胺的起始原料。对映异构体采用手性色谱条件分离控制。因此，对杂质1、杂质2、杂质3、杂质4、杂质5、杂质6、LM-1、S-IBU这八个相关物质的定量控制具有重要意义。

专利申请CN200580038847.8公开了光学活性的胺衍生物的制备方法，并记载了以pH7.0磷酸盐缓冲液-乙腈体系为流动相用高效液相色谱法分离测定原料药雷美替胺中的杂质1和杂质2的含量。

文献“Stability-indicating uplc method for determination of ramelteon and their degradation products in active pharmaceutical ingredients,Journal of Liquid Chromatography&Related Technologies,2012,35(5):688-699”公开了利用超高效液相色谱法对雷美替胺中的杂质进行定性推断和定量分析的方法，涉及的杂质包括未成盐的LM-1及合成LM-1的工艺路线中的各步中间体等4个杂质。

目前尚未见关于雷美替胺与上述八个杂质的分离测定方法的文献报道，寻找一种能够分离测定雷美替胺与该八个杂质的方法对于控制雷美替胺的质量、提高药品疗效、降低毒副作用迫在眉睫。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种通过高效液相色谱法分离测定雷美替胺及其杂质的方法以克服现有技术的不足，可以对雷美替胺原料药或其制剂进行相关杂质的分离测定。

本发明是通过以下技术手段实现的：

一种通过高效液相色谱法分离测定雷美替胺及其杂质的方法，采用以下方式进行：

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以三乙胺溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，检测波长210～310nm，柱温20～45℃，流动相速度0.5～2.0ml/min，其中三乙胺溶液为含体积分数0.1％的三乙胺并用磷酸调节pH值至3.0～7.5；

样品溶液配制：采用极性溶剂分别配制含雷美替胺及其杂质各0.01～2.0mg/ml的溶液；

测定：将溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析。

所述的通过高效液相色谱法分离测定雷美替胺及其杂质的方法，其中所述梯度洗脱为初始流动相中0.1％三乙胺溶液和乙腈的体积比为63:37～73:27，最终流动相中0.1％三乙胺溶液和乙腈体积比为63:37～73:27。

进一步，流动相中0.1％三乙胺溶液和乙腈的体积比随时间变化如下：