[发明专利]一种测定多糖糖组分的分析方法

说明书

技术领域

本发明属于多糖中糖组分的定性和定量分析技术领域，具体涉及一种测定多糖糖组分的改进分析方法。

背景技术

多糖是自然界中含量最丰富的物质之一，对维持生命活动起着至关重要的作用。在生命过程中，多糖不仅作为能量物质和结构物质，而且还具有抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、免疫调节及降血糖等多种生物活性，广泛地应用于保健食品、医药和临床上。

多糖结构分析对于多糖研究十分重要：揭示多糖构效关系、开发新型功能多糖。然而，鉴于高分子多糖的复杂性，没有直接仪器手段解析多糖结构，目前，常用的方法，均需要将多糖降解为单糖来分析，因此，多糖的糖组成分析方法包括两个步骤：多糖酸水解为含单糖的水解液及色谱法检测分析单糖。酸水解是将多糖降解为单糖的主要方法，是多糖结构分析的必要步骤。然而，多糖是一个高结晶度的高分子聚集体，结晶多糖分子排列紧密，由于多糖分子聚集体内腔的疏水作用以及分子间的空间位阻，酸在糖聚集体中渗透慢，导致水解时间延长，因此，多糖水解是一个高温强酸性条件下的长时间的化学过程；另一方面，在特定酸性条件下，不同的单糖残基水解程度不同，位于支链的糖苷键较主链的糖苷键易于水解，呋喃糖较吡喃糖易于水解；与糖醛酸相连的则糖苷键难水解鉴于天然多糖大部分为非均一的杂多糖，以上易水解和难水解的结构共存，这造成两方面的矛盾，一方面，易于水解的部分，单糖很快释放出来；另一方面，难降解部分仍需要高温强酸下长时间处理，这导致已经水解的单糖由于受到长时间高温强酸的作用，发生降解，水解液颜色较深，从而产生损失，不利于定量分析。因此，目前多糖糖组份分析的前期酸水解液普遍存在未水解残渣多、水解液颜色深，有新的糖衍生物等干扰物生成，不利于后续的色谱分析。可见，破坏高结晶多糖的网状骨架，降低分子结晶度将是提高酸水解效率的关键。

离子液体是近年来兴起的一种十分具有良好应用前景的绿色溶剂。Rogers研究组首先发现了氯化1-丁基-3-甲基咪唑([BMIM]Cl)可溶解自然界中最为广泛的多糖纤维素，Dadi等研究表明，纤维素经[BMIM]Cl离子液体预处理后可提高糖化速度。鉴于以上研究结果，将离子液应用于多糖水解的预处理，将降低多糖的结晶度，促进酸在多糖分子间的渗透，从而缩短水解时间，避免已水解单糖破坏。

目前报道单糖测定的方法主要有气相色谱法、液相色谱法、亲和色谱、酶学法和毛细管电泳法等，这些分析方法普遍灵敏度不高、分离效果差，目前通用的方法是气相色谱法，它解决了以上仪器部分分离单糖各种同分异构体的问题，但是该方法需要进行复杂的衍生化处理，同时，衍生化过程中还造成单糖的损失，给定量分析带来困难。离子色谱-脉冲安培检测糖是近年发展起来的新方法，该方法无需衍生，就能分析几乎所有的单糖和大部分寡糖及低聚糖，操作简便，无需复杂样品前处理，更无需衍生，而且具有极高的灵敏度，通常可以检测到pmoL级的糖类物质，但结合酸水解分析高结晶度的多糖中糖组分和含量，尚未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的在于提供一种联合离子液预处理、酸溶剂处理及离子色谱-脉冲安培检测法定性和定量分析高结晶多糖的单糖组分的方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种测定多糖糖组分的分析方法，包括以下步骤：

(1)离子液预处理及多糖再生：将待测多糖与离子液在油浴锅中充分溶解得到多糖溶解液，待所述多糖溶解液冷却后倒入再生溶剂中得到沉淀，反复冲洗，离心得到再生多糖粗产品，通风使再生多糖粗产品内残余的再生溶剂完全挥发，干燥后得到再生多糖；

所述待测多糖为目前常规的多糖类型，尤其可为高结晶的多糖，优选的为酵母β-葡聚糖、虫草多糖、凝结多糖或龙胆多糖中的一种；

优选的，所述离子液为1-丁基-3-甲基咪唑氯盐([Bmim]Cl)、1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐([Emim]Ac)、1-烯丙基或3-甲基咪唑氯盐([Amim]Cl)中的一种以上；

优选的，所述待测多糖与离子液的质量比为1:(15～25)；

优选的，所述充分溶解的条件为：溶解温度为80～100℃，溶解时间为2～4h；

优选的，所述多糖溶解液冷却后的温度为50℃；

优选的，所述再生溶剂为无水乙醇或水；

优选的，所述再生溶剂的用量为离子液体积的5～10倍；

优选的，所述干燥的条件为：干燥温度为50～80℃，真空度为0.05～0.1KPa，干燥时间为2～5h；