[发明专利]PCA3、CST1和CST4在制备前列腺癌标志物中的应用及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于诊断领域，具体涉及PCA3、CST1和CST4在制备前列腺癌标志物中的应用，还涉及相应的诊断试剂盒。

背景技术

前列腺癌发病率在西方国家位于男性恶性肿瘤首位，其死亡率居各种癌症的第二位，仅次于肺癌。近年来，我国前列腺癌发病率呈现逐年上升的趋势。目前前列腺癌诊断及随访主要采取尿细胞学检查与前列腺镜检相结合的方法，不仅费用昂贵，同时为患者带来较大的痛苦，而且存在感染、出血的风险。采用PSA及DRE等检测手段均难以有效地从良性病变中区分出前列腺癌患者，导致过度前列腺穿刺活检，给患者带来极大痛苦及精神和经济负担。

PSA(Prostate Specific Antigen)为前列腺组织特异性抗原，由前列腺的解剖结构可知PSA通过前列腺导管进入血液和尿液中，一些病例或生理情况下PSA会进入血液中去，如前列腺炎症、尿潴留、前列腺感染、前列腺增生和前列腺癌等，因此通过检测血清PSA水平来预测前列腺癌具有一定的假阳性率。从1991年开始，检测血清中PSA含量用于预测前列腺癌，含量高于4ng/mL认为是前列腺癌阳性，灵敏度79％，特异性20％-59％，平均灵敏度约33％，在浓度4-10ng/mL灰区部分，特异性是最低的，这时往往需要通过侵入性的穿刺活检进行确定。所以PSA并不能较好的作为诊断前列腺癌的标志物。

近年来发现的前列腺癌新的标记物PCA3(Prostate cancer antigen3)，在前列腺癌中高表达，可反应前列腺癌进展情况。PCA3位于9号染色体，含有4个外显子，为非编码的mRNA，通过选择性剪切和多聚腺苷酸化产生至少四种不同的转录产物。RT-PCR分析显示PCA3仅在前列腺组织中表达，在其他组织中不表达。Northern blot检测分析50例患者中47例PCA3高表达，而前列腺良性病变组织中不表达或低度表达[Cancer Reserch，1999，Dec，1；59(23)：5975-9]。文献[cancer res.，2002，May1；62(9)：2695-8]报道比较端粒酶RNA和PCA3RNA作为前列腺癌的标记物，PCA3指示作用更优。PCA3为到目前为止针对前列腺癌特异性最优的标志物，含有4个外显子，三个内含子，Gandini et al2003等文献报道，与其它外显子相比，PCA3外显子4用于前列腺癌检测特异性最优。但PCA3在尿样中测量有效率仅80％，因此，急需提高PCA3在尿样中检测的有效率。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin SN和Cystatin S)是人类Cystatin家族成员，为典型的分泌蛋白，分布于体液和分泌物中，如眼泪、唾液、血清、血浆等。据文献报道，CST1/4在胃肠肿瘤组织中的表达量高于正常组织，临床资料分析表明，CST1和CST4的表达与浸润深度、远处转移以及肿瘤分期(TNM分析)相关；生存分析表明，CST1和CST4表达阳性患者的5年生存率显著高于无表达组；Cox回归分析表明，CST1和CST4是一个独立预后因子；从而提示CST1和CST4可能在胃肠肿瘤的发生、发展过程中发挥类似肿瘤抑制因子的作用。但迄今为止，CST1和CST4可用于前列腺癌的诊断预示、疗效评估、转移复发监控未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供PCA3、CST1和CST4在制备诊断和预示前列腺癌标志物中的联合应用，通过PCA3、CST1和CST4联合检测，提高诊断和预示前列腺癌的特异性；本发明的目的之二在于提供PCA3、CST1和CST4联合检测前列腺癌的试剂盒，该试剂盒具有特异性高，使用方便等优点。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

1、PCA3、CST1和CST4在制备诊断和预示前列腺癌标志物中的联合应用，所述PCA3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CST1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述CST4mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

优选的，PCA3、CST1和CST4联合应用的判断公式为P＝exp(-3.914+0.025a+0.025b+0.019c)/[1+exp(-3.914+0.025a+0.025b+0.019c)]，其中a＝PCA3得分，b＝CST1得分，c＝CST4得分，PCA3得分＝(PCA3拷贝数/PSA拷贝数)×1000；CST1得分＝(CST1拷贝数/PSA拷贝数)×1000；CST4得分＝(CST4拷贝数/PSA拷贝数)×1000。