[发明专利]一种利用BiFC指示细胞中Wnt信号活性状态的载体组合物及应用

权利要求书

1.一种用于检测细胞内Wnt信号活性状态的融合蛋白组，由融合蛋白A和融合蛋白B组成：

所述融合蛋白A包括β-catenin的C端缺失片段和位于其C段的荧光蛋白片段A；

所述融合蛋白B包括转录因子TCF和位于其N段的荧光蛋白片段B；

所述β-catenin的C端缺失片段为β-catenin蛋白氨基酸序列N末端起第2-667个氨基酸残基。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白组，其特征在于：

所述融合蛋白A从N端起依次由所述β-catenin的C端缺失片段、连接肽和荧光蛋白片段A组成；

所述融合蛋白B从N端起依次由所述转录因子TCF、连接肽和荧光蛋白片段B组成；

所述荧光蛋白片段A和所述荧光蛋白片段B来源于同一个荧光蛋白或不同荧光蛋白。

3.根据权利要求2所述的融合蛋白组，其特征在于：

所述TCF为TCF1、TCF2、TCF3、TCF4或其转录变体。

所述连接肽的氨基酸序列为序列表中序列2；

所述荧光蛋白为EYFP和/或Venus荧光蛋白；

所述荧光蛋白片段A为Venus蛋白氨基酸残基自N末端第155-238位氨基酸或EYFP蛋白氨基酸残基自N末端第159-238位氨基酸；

所述荧光蛋白片段B为Venus蛋白氨基酸残基自N末端第1-173位氨基酸或EYFP蛋白氨基酸残基自N末端第1-158位氨基酸。

4.根据权利要求3所述的融合蛋白组，其特征在于：

所述融合蛋白A从N端起依次由所述β-catenin的C端缺失片段、连接肽和荧光蛋白片段A组成；所述荧光蛋白片段A为Venus蛋白氨基酸残基自N末端第155-238位氨基酸；

所述融合蛋白B从N端起依次由所述转录因子TCF3、连接肽和荧光蛋白片段B组成；所述荧光蛋白片段B为EYFP蛋白氨基酸残基自N末端第1-158位氨基酸；

所述融合蛋白A的氨基酸序列具体为序列表中的序列8；

所述融合蛋白B的氨基酸序列具体为序列表中的序列14。

5.DNA分子组，其由编码融合蛋白A的DNA分子A和编码融合蛋白B的DNA分子B组成，所述DNA分子A的核苷酸序列为序列表中序列7；所述DNA分子B的核苷酸序列为序列表中序列13。

6.重组载体组，由表达融合蛋白A的重组载体和表达融合蛋白B的重组载体组成；

所述表达融合蛋白A的重组载体为将所述编码融合蛋白A的DNA分子插入表达载体得到的载体。

所述表达融合蛋白B的重组载体为将所述编码融合蛋白B的DNA分子插入表达载体得到的载体。

7.一种转基因细胞系，为将所述表达融合蛋白A的重组载体和所述表达融合蛋白B的重组载体共同导入宿主细胞中得到的细胞系。

8.权利要求1-4中所述融合蛋白组、权利要求5所述的DNA分子组、权利要求6所述的重组载体组或权利要求7所述的转基因细胞系在利用BiFC检测影响细胞Wnt信号的物质中的应用；

或权利要求1-4中所述融合蛋白组、权利要求5所述的DNA分子组、权利要求6所述的重组载体组或权利要求7所述的转基因细胞系在利用BiFC检测细胞中Wnt活性状态中的应用。

9.一种利用BiFC检测或鉴定影响细胞内Wnt信号的物质的方法，包括如下步骤：

将小分子物质作用权利要求7所述的转基因细胞系，检测处理后的转基因细胞系，

若处理转基因细胞系的BiFC荧光信号比处理前转基因细胞系强，则所述小分子物质为激活细胞内Wnt信号的物质；

若处理转基因细胞系的BiFC荧光信号比处理前转基因细胞系弱，则所述小分子物质为抑制细胞内Wnt信号的物质；

所述小分子物质具体为导致TCF缺失的干扰RNA、GSK3β、E-cadherin、LiCl、BIO、NC043或SRSF1蛋白。

10.一种用于检测细胞内Wnt信号活性状态的方法，将所述表达融合蛋白A的重组载体和所述表达融合蛋白B的重组载体共同导入宿主细胞，得到转基因细胞，观察转基因细胞，若有荧光产生，表明激活细胞中的Wnt信号，若无荧光产生，表明未激活细胞中的Wnt信号，实现可视化观察细胞中的Wnt信号活性状态或变化。