[发明专利]一种耐万古霉素肠球菌的多重荧光定量PCR检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种耐万古霉素肠球菌的多重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：包括VanA特异性引物、VanB特异性引物、VanA荧光探针、VanB荧光探针、PCR缓冲液、脱氧三磷酸核苷混合物、DNA聚合酶、VanA基因标准品序列、VanB基因标准品序列；

其中所述VanA基因标准品序列如下：ttgacttcgt tcagtacaat gcggccgtta tcttgtaaaa acatatccac acgggctaga cctctacagc cgagcgcttt atatattttt tttgccgttt cctgtatccg tcctcgctcc；

所述VanB基因标准品序列如下：ggatcaaatc cggttgagcc acggtatctt ccgcatccat caggaaaacg agccggaaaa aggctcagag aatgcgatga ttatcgttcc agcagaca；

所述VanA特异性引物序列为：

    VanA上游引物：5′-ttgacttcgttcagtac-3′

    VanA下游引物：5′-ggagcgaggacggatacagga-3′；

所述VanB特异性引物序列为：

    VanB上游引物：5′-ggatcaaatccggttgagc-3′

    VanB下游引物：5′-tgtctgctggaacgataatca-3′；

所述VanA荧光探针：5′-FAM-ctagacctctacagccga-BHQ1-3′；

所述VanB荧光探针：5′-VIC-ccgcatccatcaggaa-BHQ1-3′；

所述脱氧三磷酸核苷混合物为ATP、TTP、CTP、GTP等比例混合。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述VanA特异性引物、VanB特异性引物、VanA荧光探针、VanB荧光探针由上海辉睿生物科技有限公司进行合成与纯化。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述10×PCR缓冲液购自美国Promega公司。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述DNA聚合酶为购自美国Promega公司的Taq DNA聚合酶。