[发明专利]美人鱼发光杆菌快速检测引物、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种美人鱼发光杆菌快速检测引物，其特征是由外引物和内引物组成，所述外引物由SEQ ID NO.1所示的外引物上游引物和SEQ ID NO.2所示的外引物下游引物组成；所述内引物由SEQ ID NO.3所示的内引物上游引物和SEQ ID NO.4所示的内引物下游引物组成。

2.一种美人鱼发光杆菌快速检测试剂盒，其特征是包括：

(1)样品预处理液，其组成为pH＝8.0的20mmol/L Tris-HCl，2mmol/L EDTA，体积浓度为1.2％Triton X-100，溶剂是蒸馏水；

(2)DEPC水；

(3)LAMP反应液，24μl LAMP反应液的组成为：2.5μl10×反应缓冲液；3μl浓度为2.5mmol/L的dNTP；1μl浓度为8U/μl的Bst DNA聚合酶；1μl浓度为5μmol/L的由SEQ ID NO.1所示的外引物上游引物，1μl浓度为5μmol/L的由SEQ ID NO.2所示的外引物下游引物，1μl浓度为40μmol/L的由SEQ ID NO.3所示的内引物上游引物，1μl浓度为40μmol/L的由SEQ ID NO.4所示的内引物下游引物；4μl1.6mol/L的甜菜碱；1μl钙黄绿素与锰离子形成的配合物、8.5μl DEPC水；

(4)阳性对照液，所述阳性对照液为1μg/ml的美人鱼发光杆菌基因组DNA；

(5)无菌封装的FTA膜片、研磨棒若干。

3.权利要求2的一种美人鱼发光杆菌快速检测试剂盒的应用，其特征是包括如下步骤：

(1)取待检样品组织加入100μl样品预处理液，研磨棒研磨，煮沸后静置10min，得到上清液；

(2)将FTA膜片在步骤(1)获得的上清液中充分润湿后室温干燥；另取两片FTA膜片分别在DEPC水、阳性对照液中充分润湿后室温干燥，作为阴性对照膜片和阳性对照膜片；

(3)将步骤(2)获得的膜片分别加入100μl DEPC水，震荡洗涤3～5min；从洗涤液中取出膜片，分别放入盛有24μl LAMP反应液的反应管中，置于60-65℃条件下保温40～60min，得到阴性对照、阳性对照和检测液；

(4)阴性对照呈橙色，阳性对照呈绿色，根据检测液颜色判断是否含有美人鱼发光杆菌。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征是所述待检样品为鱼血液、鱼脾、鱼肾组织或细菌。