[发明专利]一种microRNA在猪肌内脂肪检测中的应用

权利要求书

1.一种与猪肌内脂肪含量相关microRNA标志物在猪肌内脂肪相关检测中的应用，其特征在于该标志物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：9所示。

2.一种权利要求1所述的与猪肌内脂肪含量相关microRNA标志物的特异引物在检测与猪肌内脂肪含量相关差异microRNAs中的应用，其特征在于，所述的特异引物是如下所示的引物对和茎环引物，其核苷酸序列如下所示：

U6基因的引物：

正向引物：TCGCTTCGGCAGCACATATAC，

反向引物：CGAATTTGCGTGTCATCCTTGC；

18S rRNA基因的引物：

正向引物：CGACCATAAACGATGCCGACT，

反向引物：GTGCCCTTCCGTCAATTCCT；

ssc-miR133a3p基因的引物：

茎环引物：

GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCAGCTG，

正向引物：CGCGGATTGGTCCCCTTC，

通用引物：CCAGTGCAGGGTCCGAGGTA。

3.如权利要求2所述的与猪肌内脂肪含量相关microRNA标志物的特异引物在检测与猪肌内脂肪含量相关差异microRNAs中的应用，其特征在于，U6基因的引物、18S rRNA基因的引物以及ssc-miR133a3p基因的引物单独或组合作为检测猪肌内脂肪含量的标准化的内参标志物，其中：所述的U6基因的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示，所述18S rRNA基因的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所述，ssc-mi R133a3p基因的引物如SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7所述，这些引物单独或组合使用作为检测肌内脂肪含量的标准化的内参标志物。

4.如权利要求2所述的与猪肌内脂肪含量相关microRNA标志物的特异引物在检测与猪肌内脂肪含量相关差异microRNAs中的应用，其特征在于，采用双内标的法构建反转录反应体系，该反转录反应体系包括如下所述：

核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示的microRNAs标志物和如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的引物，该反转录反应体系如下所示：

总RNA/mRNA 20ng-5μg/5-500ng；

0.5μg/μl的Anchored Oligo(dT)₁₈引物，1μl；

0.1μg/μl的随机引物，1μl；

或0.5μl的GSP特异性引物，2pmol；

2×反转录反应Mix，10μl，RT/RI Enzyme Mix反转录酶，1μl；去基因组DNA酶，1μl；

RNase-无RNA酶水，补充至20μl。