[发明专利]一种硫碱弧菌的遗传转化方法

说明书

本发明涉及分子生物学领域，具体地，本发明涉及一种嗜盐嗜碱硫碱弧菌的遗传转化方法。本发明的硫碱弧菌的遗传转化方法，包括如下步骤：1)将分离纯化后的菌株接种在硫碱弧菌合成培养基中培养，培养时间为12～18h，OD₆₀₀值在0.5～0.9之间时收集菌体；2)通过CaCl₂‑NaCl溶液处理的方法，制备具有吸附外源DNA能力的感受态细胞；3)通过热激反应，将外源的带有抗性的质粒导入步骤2)的感受态细胞中；4)将导入质粒的感受态细胞进行孵育，涂布在抗性平板上，筛选具有抗性的转化菌株。本发明为硫碱弧菌的分子生物学和基因工程改造等研究提供了有利的工具。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地，本发明涉及一种嗜盐嗜碱硫碱弧菌的遗传转化方法。

背景技术

硫循环作为地球化学循环中主要的组成部分，在人类生产生活方面发挥着重要的作用。特别是近些年，随着环境的不断恶化，以酸雨为代表的硫污染，给人类的生存带来了极大的威胁。酸雨主要是由化石燃料燃烧和火山喷发产生的二氧化硫经氧化产生的。天然气作为化石燃料的一种，在燃烧过程中会产生二氧化硫。主要是因为天然气中含有一定量的硫化氢，不仅对钻井、套管、集输管线等设备具有强烈的腐蚀作用，而且产生的二氧化硫污染环境。天然气中含有的硫化物有H₂S、硫醇、硫醚、二硫化碳和硫化羰，天然气生物脱硫工艺处理的对象是H₂S，硫化氢(H₂S)是一种剧毒气体，对动物、微生物都有毒害作用，还会造成石油炼制过程的催化剂中毒，降低产品收率，引起设备和管路腐蚀，降低使用寿命。因此，脱硫是石油和天然气油气集输过程和石化产品加工的重要工序。在石油和天然气的各种脱硫方法中，生物脱硫技术具有经济、环保等优点，近年来在国内外相关研究与应用均展现出快速增长的势头。H₂S的脱除技术主要有LO-CAT工艺、Amine-Claus工艺、膜分离法和生物脱硫等。生物脱硫是利用微生物的代谢作用将H₂S转化为单质硫。天然气、沼气等气体中的H₂S首先被碱液吸收，然后，利用微生物处理吸收液，将H₂S转化为单质硫。生物脱硫具有低能耗、高效率、设备简单、不产生二次污染等优点。生物脱硫工艺适合的规模为100～10000Kg单质硫/天；在这个处理规模，生物脱硫工艺比LO-CAT工艺和Amine-Claus工艺更有优势。