[发明专利]一种硫碱弧菌的遗传转化方法

权利要求书

1.一种硫碱弧菌的遗传转化方法，包括如下步骤：

1)将分离纯化后的菌株接种在硫碱弧菌合成培养基中培养，培养时间为12～18h，OD₆₀₀值在0.5～0.9之间时收集菌体；其中，所述硫碱弧菌为Thioalkalivibrio versutus D301，其菌种保藏编号为CGMCC No.8497；

2)通过CaCl₂-NaCl溶液处理的方法，制备具有吸附外源DNA能力的感受态细胞；

3)通过热激反应，将外源的带有抗性的质粒导入步骤2)的感受态细胞中。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫碱弧菌合成培养基包括液体培养基，所述液体培养基组成为：

NaHCO₃ 0.7moL/L、NaOH 0.125moL/L、Na₂S₂O₃·5H₂O 0.08moL/L、K₂HPO₄·3H₂O0.009moL/L、NH₄Cl 0.005moL/L、KNO₃ 0.005moL/L、MgCl₂·6H₂O 0.005moL/L，2mL/L的微量元素溶液；

所述微量元素溶液组成为：EDTA 0.02×10^-3moL/L、FeSO₄·7H₂O 0.007×10^-3moL/L、ZnSO₄·7H₂O 0.3×10^-3moL/L、MnCl₂·4H₂O 0.15×10^-3moL/L、CoCl·6H₂O 0.84×10^-3moL/L、NiCl₂·6H₂O 0.08×10^-3moL/L、Na₂MoO₄·2H₂O 0.12×10^-3moL/L、CaCl₂·2H₂O 0.07×10^-3moL/L、H₃BO₃ 4.84×10^-3moL/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：制备感受态细胞的菌株生长状态应处于指数生长的前中期，培养液OD₆₀₀值在0.5～0.9之间。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所采用的CaCl₂-NaCl溶液总浓度为0.1～1.0mol/L，其中，Ca²⁺与Na⁺摩尔比为5：1～1：1。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中热激反应的温度为40～50℃。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中热激反应的时间为1～3min。