[发明专利]水蛭纤溶蛋白及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种水蛭纤溶蛋白，其特征在于：是通过以下方法制备得到的：

(1)水蛭纤溶蛋白粗品的提取：取宽体金线蛭干品，粉碎得水蛭干品粉末，加入15～25重量倍的水浸泡40～60小时后匀浆，得匀浆液；匀浆液用胰蛋白酶和粗酶酶解；酶解完毕后，向酶解液中加无水乙醇或体积百分数≥90的乙醇溶液，至乙醇的体积百分数达60％～80％，静置10～15小时，抽滤得上清液，上清液减压浓缩，得水蛭纤溶蛋白粗品提取液；

(2)上述水蛭纤溶蛋白粗品提取液进行QSephroseFastFlow离子交换柱层析，用0.14mol/L～2mol/L的NaCl溶液线性洗脱，得到七个洗脱峰，收集第五个洗脱峰所对应的洗脱液，浓缩并干燥，得水蛭纤溶粗蛋白；

(3)将上述得到的水蛭纤溶粗蛋白用蒸馏水溶解，SephacrylS-200凝胶过滤层析，蒸馏水洗脱，得到四个洗脱峰，取第一个洗脱峰所对应的洗脱液，浓缩并干燥，即得水蛭纤溶蛋白。

2.根据权利要求1所述的水蛭纤溶蛋白，其特征在于：所述步骤(1)中，用胰蛋白酶和粗酶酶解时，胰蛋白酶酶量为水蛭干品粉末重量的1％，粗酶酶量为水蛭干品粉末重量的5％，酶解条件为：pH8.2～8.5，温度50℃，时间9h，酶解5h后，补加胰蛋白酶，补加的酶量为水蛭干品粉末重量的1％。

3.根据权利要求1所述的水蛭纤溶蛋白，其特征在于：所述粗酶是由胰蛋白酶、α-淀粉酶和ATGL脂肪甘油三酯脂肪酶组成的，三者的配比关系为1:7:2。

4.权利要求1～3中任一项所述的水蛭纤溶蛋白的制备方法，其特征在于：步骤如下：

(1)水蛭纤溶蛋白粗品的提取：取宽体金线蛭干品，粉碎得水蛭干品粉末，加入15～25重量倍的水浸泡40～60小时后匀浆，得匀浆液；匀浆液用胰蛋白酶和粗酶酶解；酶解完毕后，向酶解液中加无水乙醇或体积百分数≥90的乙醇溶液，至乙醇的体积百分数达60％～80％，静置10～15小时，抽滤得上清液，上清液减压浓缩，得水蛭纤溶蛋白粗品提取液；

(2)上述水蛭纤溶蛋白粗品提取液进行QSephroseFastFlow离子交换柱层析，用0.14mol/L～2mol/L的NaCl溶液线性洗脱，得到七个洗脱峰，收集第五个洗脱峰所对应的洗脱液，浓缩并干燥，得水蛭纤溶粗蛋白；

(3)将上述得到的水蛭纤溶粗蛋白用蒸馏水溶解，SephacrylS-200凝胶过滤层析，蒸馏水洗脱，得到四个洗脱峰，取第一个洗脱峰所对应的洗脱液，浓缩并干燥，即得水蛭纤溶蛋白。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中，用胰蛋白酶和粗酶酶解时，胰蛋白酶酶量为水蛭干品粉末重量的1％，粗酶酶量为水蛭干品粉末重量的5％，酶解条件为：pH8.2～8.5，温度50℃，时间9h，酶解5h后，补加胰蛋白酶，补加的酶量为水蛭干品粉末重量的1％。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述粗酶是由胰蛋白酶、α-淀粉酶和ATGL脂肪甘油三酯脂肪酶组成的，三者的配比关系为1:7:2。

7.权利要求1～3中任一项所述的水蛭纤溶蛋白在制备溶栓药物中的应用。