[发明专利]肺炎链球菌十三种荚膜多糖单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学领域及抗体制备技术，具体地说，涉及肺炎链球菌十三种荚膜多糖单克隆抗体及其应用。

背景技术

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)可以引发肺炎、中耳炎、脑膜炎、菌血症和败血症等多种疾病，是引起全世界范围内婴幼儿、老年人和免疫缺陷个体疾病的主要病原菌，5岁以下小儿和60岁以上老人普遍易感。作为儿科常见病的肺炎，每年可导致约140万儿童死亡(其中99％的死亡发生在发展中国家)，是儿童死亡的第一病因。

肺炎链球菌是革兰氏阳性、带荚膜的双球菌，链球菌属。存在于荚膜中的荚膜多糖为肺炎链球菌重要的致病因子，由大量多聚体组成，能帮助入侵寄主的免疫系统。肺炎链球菌可以在5-10％的健康成人及20-40％孩童的鼻咽内发现。它利用表面黏着素与上皮细胞的相互作用，紧贴在鼻咽细胞上。肺炎链球菌可直接通过密切接触，经呼吸道飞沫进行人际传播。若将肺炎链球菌吸入肺部而不能清理，加上病毒感染或吸烟引发的纤毛痳痹，就会造成肺炎。一旦肺炎链球菌进入一些很难发现的地方，它就会活性化补体蛋白质，刺激细胞激素的生成及吸引白血球(尤其是嗜中性白血球)。它的多糖荚膜会抵抗吞噬作用，若并没有抗荚膜的抗体，肺泡巨噬细胞则不能有效地杀死它们。若它们扩散至血液中，就可能会引发菌血症，并且被带到身体的其他地方，如脑膜、关节、骨骼及腹膜，亦可能会导致脑膜炎、脑脓肿、骨髓炎或脓毒性关节炎等。

根据肺炎链球菌荚膜多糖的组成差异，分为91个肺炎链球菌血清型，各血清型均有其独特的多糖荚膜。血清型是以两种系统来编号，源自美国的系统是按照其发现的先后次序来编号，而源自丹麦的系统则是以抗原的相似性来编号。不同年龄、时间和地域的血清型分布谱也有所不同，但全球常见的致病血清型是一致的。在全球范围，肺炎链球菌对常用抗菌药物(如青霉素、头孢霉素、甲氧苄啶-磺胺甲唑、大环内酯类和氯霉素)产生耐药性已成为一个日益严重的问题，这使得特异性治疗更加复杂，也凸显了接种疫苗预防肺炎链球菌疾病的重要性。目前临床用肺炎链球菌疫苗主要有三种：包含7种血清型(4、6B、9V、14、18C、19F和23F)的七价肺炎链球菌疫苗；包含十三种血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F)的十三价肺炎链球菌疫苗和包含23种血清型(1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F)的二十三价肺炎链球菌疫苗。

目前对肺炎链球菌血清分型的鉴定方法，大多数临床微生物学实验室是通过肺炎链球菌培养进行实验室诊断，但如果在采集标本前进行过抗生素治疗，或者处理或运输标本不当以及使用不合适的培养基都可能导致分离失败。因此亟待开发一种快速鉴别诊断肺炎链球菌各血清分型的方法。

发明内容

本发明的目的是提供肺炎链球菌十三种荚膜多糖单克隆抗体及其应用。

为了实现本发明目的，本发明首先提供一种单克隆抗体，分别以十三价肺炎链球菌结合疫苗中的十三种肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)荚膜多糖为靶抗原，以十三价肺炎链球菌结合疫苗作为免疫原，免疫动物(如小鼠)制备获得。其中，十三种肺炎链球菌荚膜多糖的血清型分别为1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F；所述十三价肺炎链球菌结合疫苗是由上述十三种不同血清型的肺炎链球菌荚膜多糖和载体蛋白共价连接形成的。

所述单克隆抗体能够特异性地识别1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F或23F血清型的肺炎链球菌病原体和载体蛋白。

前述的载体蛋白为白喉毒素CRM197蛋白或破伤风类毒素TT蛋白等本领域常用的载体蛋白。

具体地，以十三价肺炎链球菌结合疫苗作为免疫原免疫小鼠，采用杂交瘤技术经过细胞融合，筛选得到能持续、稳定分泌抗肺炎链球菌十三种荚膜多糖和载体蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，由各细胞株分泌得到几十种单克隆抗体。

所述单克隆抗体选自T1、T3、T4、T5、T6A、T6B、T7F、T9V、T14、T18C、T19A、T19F或T23F中的任一种，它们的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1-26所示。