[发明专利]一种前列腺癌超声诊断靶向试剂及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及超声诊断所用的靶向试剂，具体地说，涉及一种前列腺癌超声诊断靶向试剂及制备方法。

背景技术

超声检查是前列腺疾病的首选而重要的影像学检查手段，但是目前所有的影像学检查都不能敏感地区分慢性前列腺炎、前列腺肥大与早期前列腺癌，其鉴别诊断仍依赖于有创的经直肠超声引导下前列腺多点穿刺活检。近年来，超声仪器性能改进，新一代声学造影剂的出现为超声诊断开创了新的应用领域。同时，超声造影增强技术（Contrast Enhanced Ultrasound，CEUS）在诊断领域得到进一步发展，已成为诊断前列腺癌的无创性影像学手段之一。研究证明，二者结合可有效增强实质性器官的二维超声影像和血流多普勒信号，明显提高超声诊断的敏感性和特异性。

随着各种新型超声造影剂的出现和超声显像技术的不断发展，微泡造影剂（如国内临床采用Braco公司生产的Sonovue造影剂）开始应用于前列腺病变的检查，但其敏感性较低，特异性不高，是一种无定向选择作用的全身性造影剂。此外，尚有采用全氟溴辛烷等氟碳制备纳米造影剂的报道（张华娟等. 一种全氟碳化合物脂质体纳米球及其制备方法.中国专利，申请号201210549252.0），从而克服微泡造影剂无法达到血管外肿瘤组织成像的目的。但是，前列腺癌病人的临床症状相对隐蔽，这为前列腺癌的诊断带来了很大的困难。国内外近几年已经开始了靶向超声造影剂的相关研究（李浪，等. 携载PSMA单抗靶向前列腺癌的纳米级脂质微泡的制备及体外寻靶能力. 中国医学影像技术，2012；28（8）：1449-1453），通过靶向超声造影剂，使其聚集于靶组织，达到特异性增强显影效果。

近年研究发现上皮细胞黏附分子（epithelial cellular adhesion molecule，EpCAM，又称CD326）是一种高表达于大多数恶性上皮肿瘤细胞表面的糖蛋白，具有加快细胞周期、促进细胞增殖、分化、迁移以及免疫逃逸、肿瘤干细胞特性等多种生物学功能，是目前表达最强的肿瘤表面抗原之一。EpCAM在激素非依赖性前列腺癌细胞株（如PC3、DU145等）、激素依赖性前列腺癌细胞株（如LNCaP、DuCaP）、淋巴结转移前列腺癌细胞中均高表达，转移性难治性前列腺癌病人的血循环前列腺癌细胞80%以上高表达EpCAM，因此EpCAM适合作为前列腺癌诊断和治疗的靶点。

适体（aptamer）是一类相对较短的单链DNA或RNA寡聚核苷酸，在体内以特定的三维结构存在，并与靶蛋白通过高亲和力结合，从而发挥生理作用。适体与靶细胞结合的特异性与单克隆抗体相似，甚至更高。适体没有明显的免疫原性，其介导的靶向药物注入人体内不会引发免疫反应。适体分子体积较小，当适体连接到药物载体表面时，系统的体积不会有很大的增加，使药物载体体积更容易控制。更重要的是适体制备方便，且比单克隆抗体有更高的稳定性，可以在许多缓冲溶液中保存。

Shigdar等设计了多种靶向EpCAM的核酸酶抵抗适体（Shigdar S, Lin J, Yu Y, Pastuovic M, Wei M, Duan W. RNA aptamer against a cancer stem cell marker epithelial cell adhesion molecule. Cancer Sci, 2011; 102(5):991-8），发现仅有19nt的EpDT3适体与EpCAM结合后能够以能量依赖方式通过受体介导的内吞机制进入肿瘤细胞内，因此EpDT3适体有望用于前列腺癌的靶向诊断。

基于上述认知，理论上可以制备EpDT3修饰的靶向超声造影剂，运用于CEUS中，以实现前列腺癌的特异性显影。但是目前关于此类靶向超声造影剂还未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种前列腺癌超声诊断靶向试剂。

本发明的再一的目的是，提供上述前列腺癌超声诊断靶向试剂的制备方法。

本发明的另一的目的是，提供上述前列腺癌超声诊断靶向试剂的用途。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种前列腺癌超声诊断靶向试剂，所述的靶向试剂含有全氟溴辛烷纳米粒，所述的全氟溴辛烷纳米粒被EpDT3适体所修饰，所述的EpDT3适体选自：

a）EpDT3-SH：5' - GCGACUGGUUACCCGGUCG- (CH₂)6- SH- 3'，且具有2'-氟代嘧啶修饰，或