[发明专利]酶法降解浒苔多糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品生物技术领域，涉及一种酶法降解浒苔多糖的方法。

背景技术

浒苔是我国东南沿海的一种大型经济性绿藻，资源丰富，本身可以食用，并含有多种活性物质，如浒苔多糖，脂类色素，酚类等。据文献报道，浒苔多糖具有提高哺乳动物免疫力、降血脂、消炎抗菌以及抗氧化等生理功能。因此将浒苔开发成功能食品有很好的前景。浒苔水提多糖主要为水溶性的硫酸多糖，其组成主要是葡萄糖醛酸-木糖-鼠李糖聚合物。浒苔多糖分子量大，如果将其降解成分子量相对较小的产物，则由于游离出更多的活性基团，能会使其生物活性得到提高。

据报道，浒苔多糖糖键类型主要是β-1,4、α-1,2、α-1,4、α-1,2,4和β-1,6，还含有较少量的β-1,3和α-1,3糖苷键。

酸降解是多糖降解的传统方法，可通过调节酸度、温度和作用时间得到不同降解程度的水解产物。但硫酸多糖在降解过程中其硫酸基易被水解脱落，硫酸基含量的降低会导致多糖的生理活性降低；该方法的降解率为40.05％；分子量范围一般为5.32～95.6kDa。

氧化降解虽可减少多糖在降解过程中的硫酸基脱落，但氧化产物相对较复杂，增加了分离纯化的难度。该方法的降解率为61.32％；分子量范围一般为2.28～55.9kDa。

酶法降解作用条件温和，也可避免硫酸基的脱落，但不易得到水解效率高的酶。但目前对浒苔多糖的酶法降解很少有见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种水解效率高、体外抗氧化活性好的酶法降解浒苔多糖的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种酶法降解浒苔多糖的方法，将浒苔粗多糖或浒苔多糖配置成浓度为1～20mg/mL(较佳为4～6mg/mL)的多糖溶液；然后以糖化酶(葡萄糖淀粉酶)作为水解酶，在多糖溶液中加入糖化酶直至糖化酶的终浓度为2～100U/mL(较佳为10～20U/mL)；于pH为3.5～5.5、温度为40～60℃反应1～5小时(较佳为于pH为4.5，49℃反应2小时)，得首次酶解降解多糖溶液；将首次酶解降解多糖溶液煮沸4～6分钟后，离心以除去糖化酶，得含有首次酶解降解后浒苔多糖的上清液。

备注说明：将浒苔粗多糖或浒苔多糖配置成浓度为1～20mg/mL的多糖溶液，即为：当选用浒苔粗多糖时，浒苔粗多糖的浓度为1～20mg/mL；当选用浒苔多糖时，浒苔多糖的浓度为1～20mg/mL。

离心是指：7000～9000r/s离心4～6min。

作为本发明的酶法降解浒苔多糖的方法的改进：将含有首次酶解降解后浒苔多糖的上清液用截留分子量为500的透析袋透析，以除去无机盐；得透析液；将透析液冷冻干燥，得粉末状的酶解降解浒苔多糖(分子量较低，分子量范围为7.2～122kDa之间)。

备注说明：上述透析时间为20～28小时；冷冻干燥是指在-45～-55℃干燥20～28小时。

作为本发明的酶法降解浒苔多糖的方法的另一种改进：将含有首次酶解降解后浒苔多糖的上清液进行再次水解，所述再次水解包括如下步骤：

在含有首次酶解降解后浒苔多糖的上清液中加入果胶酶，所述果胶酶的用量为浒苔粗多糖或浒苔多糖重量的1～10％(较佳为6～9％)；于pH为3.5～5.5、温度为45～60℃反应1～5小时(较佳为pH为4.5，温度为56℃反应3小时)，得再次酶解降解多糖溶液；将再次酶解降解多糖溶液煮沸4～6分钟后，离心以除去果胶酶，得含有再次酶解降解后浒苔多糖的上清液。

备注说明：果胶酶的酶活为30U/mg。离心是指：7000～9000r/s离心4～6min。

作为本发明的酶法降解浒苔多糖的方法的进一步改进：

将含有再次酶解降解后浒苔多糖的上清液用截留分子量为500的透析袋透析，以除去无机盐；得透析液；将透析液冷冻干燥，得粉末状的酶解降解浒苔多糖(分子量较低，分子量范围为7.2～122kDa之间)。

备注说明：上述透析时间为20～28小时；冷冻干燥是指在-45～-55℃干燥20～28小时。

在本发明中，可用pH3.5～5.5的乙酸-乙酸钠缓冲液进行pH值的调节控制。

本发明所使用的浒苔粗多糖的纯度(质量含量)为75～80％。

在本发明中，浒苔粗多糖或浒苔多糖均可通过公知技术获得，例如，浒苔粗多糖也可通过如下方法制备而得：

1)、将干燥(含水率≤8.21％，质量％)后的浒苔用捣碎机进行粉碎，过120目筛，得浒苔粉末。

2)、乙醇除杂：